In vitro Incubation and Functional Study of the Pig Intestinal Microbiota

材料与试剂

1. 灭菌棉拭子
2. 一次性无菌橡胶手套
3. 灭菌纱布
4. 枪头：10 μl、200 μl、1000 μl
5. 移液管：5 ml、10 ml
6. 离心管：1.5 ml、2 ml、15 ml、50 ml
7. 无菌注射器：1 ml、5 ml
8. 0.22 μm针式滤器（上海生工，目录号：F513163）
9. Hungate厌氧管
10. 150 ml血清瓶
11. 蓝盖试剂瓶：250 ml
12. 玻璃珠：3-4 mm
13. 锆珠：0.1 mm直径（Biospec，目录号：11079101z）
14. CO2气体
15. 试验动物：商品猪或土种猪（根据实验目的确定性别、日龄、日粮）
16. 微生物总DNA提取试剂盒：QIAamp Fast DNA Stool Mini（QIAGEN，目录号：51604）
17. 微生物RNA保护试剂：RNAprotect Bacteria Reagent （QIAGEN，目录号：76506）
18. 微生物总RNA提取试剂盒：RNeasy Mini Kit（QIAGEN，目录号：74104）
19. 第一链反转录试剂盒：SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix kit（Thermo Fisher，目录号：18080400）
20. 厌氧磷酸盐缓冲溶液（PBS；pH 7.4，见溶液配方）
21. 0.1%吐温80生理盐水溶液
22. 刃天青溶液（见溶液配方）
23. 微量元素溶液（见溶液配方）
24. 碳酸氢钠溶液（见溶液配方）
25. 脂肪酸溶液（见溶液配方）
26. 微量元素溶液（见溶液配方）
27. 血红素溶液（见溶液配方）
28. 还原剂溶液（见溶液配方）
29. 维生素母液（见溶液配方）
30. 氨基酸母液（见溶液配方）
31. 40%厌氧甘油（见溶液配方）
32. 灭菌厌氧生理盐水（见溶液配方）
    

仪器设备

1. 移液器（Eppendorf，型号：2.5 μl、10 μl、100 μl、200 μl、1000 μl）
2. 电动助吸器（Eppendorf，型号：5-50 ml）
3. 高压蒸汽灭菌锅（Sanyo，型号：MLS-3750）
4. 离心机（Eppendorf，型号：5810 R）
5. 超纯水系统（Sartoris，型号：Arium Pro VF）
6. PCR 仪（Bio-rad，型号：DNAengine）
7. 涡旋混匀仪（Scientific Industries，型号：SI Vortex Genie 2）
8. 冷藏冷冻冰箱（西门子，型号：BCD-610W）
9. 超低温冰箱（Thermo，型号：MLT）
10. 恒温培养箱（上海恒字，型号：PYX-DHS.500BS）
    

实验步骤