材料与试剂

1.  DNA提取缓冲液Extraction buffer
   
   1.1

   6.8 ml 1 M NaH₂PO₄ (一价)
   1.2

   93.2 ml 1 M Na₂HPO₄ (二价)
   注：在磷酸盐溶液中加入NaOH溶液直至pH为8，再加入剩余溶液
   1.3

   200 ml 0.5 M EDTA, pH 8.0
   1.4

   100 ml 1 M Tris-HCl, pH 8.0
   1.5

   300 ml 5 M NaCl
   1.6

   100 ml 10% CTAB (对于过滤样本，不要使用CTAB)
   加入去离子水至1 L；如果不加CTAB，加入去离子水至900 ml
   (终浓度：0.1 M NaH₂PO₄, 0.1 M Na₂HPO₄, 0.1 M EDTA, 0.1 M Tris-HCl, 1.5 M NaCl, 1% CTAB)
2.  其它需要的化学物质
   
   2.1

   10 mg/ml蛋白酶 K (Proteinase K) (储藏在-20 °C)
   2.2

   20% SDS (预制)
   2.3

   70%冰乙醇 (储藏在-20 °C)
   2.4

   2-异丙醇
   2.5

   0.5 M EDTA, pH 8.0
   2.6

   1 M Tris-HCl
   2.7

   *100× TE (Sigma, catalog number: T9285-100ML)
   2.8

   *(可选) 氯仿：异戊醇 (24:1)
   注：将氯仿和异戊醇混合后储存在深色的或包裹锡箔纸的瓶子里，并放在通风橱的防燃柜里
3.  试剂盒Kit
   MO BIO PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit (MO BIO, catalog number: 12997-50) 或者 MO BIO PowerSoil® DNA Isolation Kit (MO BIO, catalog number: 12888-100 or 12888-50), 现在是DNeasy® PowerClean® Pro Cleanup Kit (50) (QIAGEN, catalog number: 12997-50) 或者 DNeasy® PowerSoil® Kit (QIAGEN, catalog number: 12888-100) (图1)
    
   
   图1. DNA提取试剂盒DNeasy® PowerSoil® Kit (QIAGEN, catalog number: 12888-100)
   
   
   
4.  其它说明
   本方法中使用的Oak Ridge tubes (图2) 不要进行高压蒸汽灭菌。因为DNA分子在经过高温蒸汽灭菌的Oak Ridge tubes中难以聚集成紧密的颗粒，以至于肉眼不可见。使用后用去离子水冲洗，并在去离子水中煮沸20 min。冷却后，用70% 乙醇冲洗试管并干燥。
   
   
   图2. Oak Ridge tube

仪器设备

1.  移液枪
2.  离心机 (图3，图4)
   
   
   图3. 2 ml离心管离心机
   
   
   图4. 15 ml离心管离心机
   
   
3.  Nanodrop
4.  涡旋仪 (图5)
   
   
   图5. 涡旋仪
   
   
5. 水浴锅
   

实验步骤