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瘤胃内容物样本中有机酸的定量分析 (高效液相色谱)

Quantitative Analysis of Organic Acids in Samples of Rumen Content (HPLC)

王 王阔鹏
吉 吉慧敏
程 程志强
林 林淼

发表时间: 2021年04月23日 DOI: 10.21769/BioProtoc.2003682 浏览次数: 2518

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摘要：反刍动物通过瘤胃微生物发酵饲粮中的碳水化合物产生大量的有机酸，主要为挥发性脂肪酸，这些有机酸不仅起到了维持瘤胃内环境稳态的作用，而且反映了个体能量代谢和饲粮发酵类型，因此准确检测瘤胃液有机酸各成分含量对评定饲料营养价值及进一步提高反刍动物能量转化效率具有重要意义。本文介绍了一种利用高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) 测定瘤胃发酵样品中的有机酸含量。样品前处理方法利用氢氧化钙 [Ca(OH)2] 和硫酸铜 (CuSO4) 溶液去除样品中的蛋白和糖类。高效液相色谱法仅要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，可分离热不稳定和非挥发性的等各分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPLC能达到高分辨率和高灵敏度。此方法还可用于检测瘤胃液及发酵样品中的乳酸、琥珀酸的含量。

Keywords: 有机酸 search 液相色谱 search 体外发酵 search 瘤胃液 search

材料与试剂

  1. 枪头 (10, 200和1000 μl)
  2. 离心管2 ml
  3. 超纯水
  4. 封口膜
  5. 滤膜 (0.2 μm)
  6. 氢氧化钙 (国药集团化学试剂有限公司，中国，分析纯)
  7. 硫酸铜 (国药集团化学试剂有限公司，中国，分析纯)
  8. 巴豆酸 (Macklin，色谱纯)
  9. 浓硫酸 (H2SO4，沪试，优级纯)
  10. 乙二胺四乙酸 (阿拉丁，色谱纯)
  11. 琥珀酸 (阿拉丁，色谱纯)
  12. 乳酸 (阿拉丁，色谱纯)
  13. C1-C6 (阿拉丁，色谱纯)
  14. 氢氧化钙溶液 (见溶液配方)
  15. 硫酸铜溶液 (见溶液配方)
  16. EDTA溶液 (见溶液配方)
  17. 混合标准酸溶液 (见溶液配方)
  18. 标样中有机酸浓度 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 螺口瓶 (250 ml)
  2. 锥形瓶 (500 ml)
  3. 容量瓶 (500 ml)
  4. 量筒 (500 ml)
  5. 烧杯 (4 L)
  6. 玻璃棒
  7. 高效液相色谱仪 (Waters 1525)
  8. 磁力搅拌器 (上海雷磁 JB-2A)
  9. 离心机 (Eppendorf 5810R)
  10. 真空泵 (上海亚荣 YR-PTB)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王阔鹏, 吉慧敏, 程志强, 林淼. (2021). 瘤胃内容物样本中有机酸的定量分析 (高效液相色谱). // 微生物组实验手册. Bio-101: e2003682. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003682.
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How to cite: Wang, K. P., Ji, H. M., Cheng, Z. Q. and Li, M. (2021). Quantitative Analysis of Organic Acids in Samples of Rumen Content (HPLC). // Microbiome Protocols eBook. Bio-101: e2003682. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003682.
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分类

系统生物学 > 微生物组学

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