材料与试剂

1. 2 ml冻存管（南京杰汶达生物科技有限公司，中国，规格：2 ml）
2. 异丁基橡胶塞（北京丰美仪器公司，中国，规格：20 mm）
3. 铝盖（南京杰汶达生物科技有限公司，中国，规格：20 mm）
4. 厌氧滚管（北京丰美仪器公司，中国，规格：30 ml）
5. 一次性使用无菌注射器（陕西龙康鑫医疗器械有限公司，中国，规格：2 ml）
6. 钢针（上海米沙瓦医科工业有限公司，中国， 规格：1.2* 30 mm，18G）
7. 宽底细颈瓶（南京金正教学仪器有限公司，中国，定制（参数见图1））
8. 一次性塑料接种环（比克曼生物科技有限公司，中国，规格：1 μl）
9. 血清瓶（南京金正教学仪器有限公司，中国，规格：180 ml）
10. 帆船牌载玻片（盐城市飞舟玻璃有限公司，中国，规格：25.4* 76.2 mm）
11. 二氧化碳（南京特种气体厂，中国，分析纯）
12. 氯霉素（北京索莱宝科技有限公司，中国，分析纯）
13. KOH（西陇科学股份有限公司，中国，分析纯）
14. K₂HPO₄（西陇化工股份有限公司，中国，分析纯）
15. KH₂PO₄（西陇科学股份有限公司，中国，分析纯）
16. (NH₄)₂SO₄（永华化学科技(江苏)有限公司，中国，分析纯）
17. MgSO₄·7H₂O（西陇科学股份有限公司，中国，分析纯）
18. CaCl₂·2H₂O（国药集团化学试剂有限公司，中国，分析纯）
19. NaCl（天津市科密欧化学试剂有限公司，中国，分析纯）
20. Na₂CO₃（永华化学科技(江苏)有限公司，中国，分析纯）
21. 刃天青（上海源叶生物科技有限公司，中国，FMP，75%）
22. Yeast Extract（Oxoid, England, Typical analysis）
23. Tryptone（Oxoid, England, Typical analysis）
24. NaHCO₃（广东光华科技股份有限公司，中国，分析纯）
25. L-半胱氨酸盐酸盐（上海惠兴生化试剂有限公司，中国，含量 99.0%）
26. D(+)-纤维二糖（北京索莱宝科技有限公司，中国，纯度 99%）
27. 二甲基亚砜（上海凌峰化学试剂有限公司，中国，分析纯）
28. 琼脂（北京索莱宝科技有限公司，中国，BR强度1,200 g/cm³）
29. 甲醇（广东光华科技股份有限公司，中国，分析纯）
30. 1X PBS缓冲液（北京索莱宝科技有限公司，中国，pH 7.2~7.4，0.01 M）
31. 即用型DAPI染色液（江苏凯基生物技术股份有限公司，中国，纯度 90%）
32. 缓冲液A（见溶液配方）
33. 缓冲液B（见溶液配方）
34. 缓冲液C（见溶液配方）
35. 无细胞瘤胃液（见溶液配方）
36. 0.1% 刃天青溶液（见溶液配方）
37. 复合培养基（见溶液配方）
38. 纤维二糖培养基（见溶液配方）
39. 稻秸培养基（见溶液配方）
40. 固体培养基（见溶液配方）
41. 8% Na₂CO₃溶液（见溶液配方）
42. 厌氧稀释液（见溶液配方）
43. 氯霉素溶液（见溶液配方）
    
    
    图1. 宽底细颈瓶及其定制参数
    

仪器设备

1. 液氮罐（金凤，规格：30 L）
2. 微波炉（格兰仕，规格：32 L）
3. 量筒（蜀牛，规格：1 L）
4. 电子天平（英衡，规格：最大量程100 g，精度0.001 g）
5. 离心机（HERAEUS, 规格：最大离心率为21,980 × g，容量1.5~120 ml，温控制冷）
6. 隔水式恒温培养箱（BINDER, 规格：温度范围30~70 °C，容量115 L，液压机械温控器）
7. 4 °C冰箱（海尔, 规格：温度范围2~8 °C，容量390 L）
8. -20 °C冰箱（海尔, 规格：温度范围-10~-25 °C，容量262 L）
9. 高压灭菌器（TOMY, 规格：灭菌温度范围105~135 °C，有效腔体容量50 L）
10. 磁力搅拌器（CRYSTAL，规格：最高转速25 × g，最大搅拌容量（水）10,00 ml，环境温度5~40 °C）
11. pH计（METTLER TOLEDO，规格：pH测量范围-2~20，pH准确度（±）0.01，温度范围-5~105 °C，温度准确度（±）0.5 °C）
12. 厌氧工作站（DON WHITLEY SCIENTIFIC，规格：温度范围5~60 °C，有效内腔容量140 L，双气路模式）
13. 激光共聚焦显微镜（CARL ZEISS MICROSCOPY GMBH，规格：ICCS无限远复消色差及反差增强型光学系统，总放大倍率12.5~20,000X，激光405 nm波长，横向分辨率120 nm）
    

实验步骤