Method for Purification and Rapid Identification of Tree Associated Symbiotic of Fungi

材料与试剂

1. 一次性培养皿
   
2. 1.5 ml无菌离心管
   
3. 2 ml无菌离心管
   
4. 1.8 ml塑料冷冻管
   
5. 无纺纱布
   
6. 50 ml离心管 (BD Falcon)
   
7. 10 ml 离心管
   
8. 10 ml无菌注射器
   
9. 封口膜 (Polisciences Inc公司，Parafilm，catalog number: PM996)
   
10. 不同规格枪头 (蓝色枪头，黄色枪头，白色枪头，10 ml或5 ml枪头)
    
11. 新星高级擦镜纸 (杭州特种纸业有限公司，杭州，规格10 × 15 cm)
    
12. 马铃薯，胡萝卜 (超市购买)
    
13. 分析纯乙醇 (国药集团化学试剂有限公司，沪试，catalog number: 80176961)
    
14. 分析纯丙三醇 (国药集团化学试剂有限公司，沪试，catalog number: 10010618)
    
15. 次氯酸钠 (国药集团化学试剂有限公司，沪试，catalog number: 80010428)
    
16. 冰醋酸 (国药集团化学试剂有限公司，沪试，catalog number: L01099402)
    
17. Oxoid™ Malt Extract (Thermo Scientific™，OXOID，catalog number: LP0039B)
    
18. 纯净水 (超纯水)
    
19. 琼脂糖 (北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，Genview，catalog number: 9012-36-6)
    
20. Tris (北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，Genview，catalog number: 77-86-1)
    
21. 葡萄糖 (上海麦克林生化科技有限公司，麦克林，catalog number: D810588)
    
22. 琼脂粉 (北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，DING GOU，catalog number: DH010-1.1)
    
23. ITS通用引物以及其他引物订购 (北京擎科新业生物技术有限公司，杭州合成 部)
    
24. PBS粉末 (生工生物工程 (上海) 股份有限公司，BBI，catalog number: PD0100)
    
25. 玉米粉琼脂 (生物风，ELITE-MEDIA，catalog number: M307-01)
    
26. 硫酸链霉素 (Genview公司，Genview，catalog number: 3810-74-0)
    
27. 盐酸强力霉素 (上海麦克林生化科技有限公司，麦克林，catalog number: D8075 03)
    
28. 真菌基因组DNA试剂盒 (北京艾德莱科技生物有限公司，艾德莱，catalog number: DN4102)
    
29. 绿如蓝核酸染料 (北京百奥莱博科技有限公司，百奥莱博，catalog number: BTN 70303)
    

仪器设备

1. 无菌涂布棒
   
2. 接种针
   
3. 不同规格的钢珠 (2 mm、4 mm)
   
4. 155 mm的得力剪刀
   
5. 美的电磁炉
   
6. 容量约为5 L的普通锅
   
7. 超净工作台 (苏净集团苏州安泰空气技术有限公司，苏州安泰，catalog number: SW-CJ-1FD)
   
8. 霉菌培养箱 (上海博讯实业有限公司医疗设备厂，catalog number: MJX-250B-Z型)
   
9. 不锈钢酒精灯 (国药集团化学试剂有限公司，catalog number: CC-4566-03)
   
10. 电泳仪设备 (北京六一仪器厂，北京六一，catalog number: DYY-6C)
    
11. 立式压力蒸汽灭菌器 (上海申安医疗机器厂，申安，catalog number: LDZF-50KB-Ⅱ)
    
12. 涡旋振荡器 (MoBio公司，MoBio，catalog number: Vortex-Genie 2)
    
13. 台式高速冷冻离心机 (Sigma公司，Sigma，catalog number: 3K15)
    
14. 电子精密天平 (上海民桥精密科学仪器有限公司，MINQIAO，catalog number: JA1103 FA/JA系列)
    
15. MyCycler PCR扩增仪 (Bio-Rad公司，Bio-Rad，catalog number: MyCycler)
    
16. 光学显微镜 (Carl Zeiss, Germany，catalog number: AxioScope A1)
    
17. 雪科制冰机 (常熟市雪科电器有限公司，雪科，catalog number: IMS-20)
    
18. 冷冻切片机 (Thermo，catalog number: Cryostar NX70)
    

软件和数据库

1. NCBI数据库BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)
   
2. BioEdit v7.2 (https://bioedit.software.informer.com/7.2/)
   
3. GeneDoc v2.7.0 (https://genedoc.software.informer.com/download/)
   

实验步骤