DNA Extraction from the Faeces of Young Ruminants

背景

幼龄反刍动物的胎粪水分含量低，粘稠度高，不利于DNA的提取。动物出生后数天内，体内的胎粪尚未完全排出，胎粪与消化后的奶进一步混合，使得粪便的成分更加复杂，从而加大了后续DNA提取的难度。采用普通的粪便或消化道内容物DNA提取方法难以获得高质量、高纯度的粪便DNA，无法满足后续微生物多样性分析等测定要求。为此，本文提供一种幼龄反刍动物粪便DNA的提取方法，旨在为幼龄反刍动物粪便微生物分析提供便利。

材料与试剂

1. 无菌枪头
2. 2 ml研磨管 (研磨仪配套或其他适配研磨仪离心管均可)
3. 1.5 ml、2 ml离心管 (浙江同力信息科技有限公司, catalog number: 68800012)
4. 0.1 mm、0.5 mm和2 mm氧化锆球磨珠
5. Tris饱和酚溶液 (生工生物工程股份有限公司, catalog number: A504193)
6. 氯仿-异戊醇，24:1 (Merck, Sigma-Aldrich, catalog number: 25668)
7. 酚氯仿，25:24:1 (Merck, Sigma-Aldrich, catalog number: 77617)
8. RNase A，10 mg/ml (生工生物工程股份有限公司, catalog number: B500474)
9. 乙醇95% (国药集团化学试剂有限公司, catalog number: 10009128)
10. 乙醇70%
11. 核酸纯化吸附柱 (生工生物工程股份有限公司, catalog number: B615005)
12. 灭菌超纯水
13. Tris (生工生物工程股份有限公司, catalog number: A100826)
14. 乙二胺四乙酸二钠盐二水 (EDTA, 生工生物工程股份有限公司, catalog number: A500838)
15. NaAc·3H₂O (生工生物工程股份有限公司, catalog number: A610481)
16. 冰醋酸 (生工生物工程股份有限公司, catalog number: A501931)
17. 3 M醋酸钠，pH 5.2 (见溶液配方)
18. TE缓冲液 (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 研磨仪 (上海净信实业发展有限公司, catalog number: JXFSTPRP-24)
2. 离心机 (赛默飞世尔科技有限公司, catalog number: SL40)
3. 超净台 (上海博迅医疗生物仪器股份有限公司, catalog number: VS-840-1)
4. 涡旋仪 (大龙兴创实验仪器股份公司, catalog number: MX-S)
5.  -20 °C冰箱
   

实验步骤