Construction of EGFP Fluorescent-labeled E. coli strain

材料与试剂

1. 超白玻璃盖玻片 (江苏世泰实验器材有限公司，catalog number: 80340)
2. 粘附载玻片 (江苏世泰实验器材有限公司，catalog number: 80312-3161)
3. 50 ml离心管 (美国康宁corning离心管，catalog number:430828)
4. 2.0 ml的离心管 (美国康宁corning离心管，catalog number:430659)
5. E. coli MG1655 (中国典型培养物保藏中心)
6. CV129质粒 (EcoRI/XhoI酶切) (上海吉凯基因化学技术有限公司)
7. C57BL/6J小鼠 (北京维通利华实验动物技术有限公司)
8. 无菌 (无抗生素) LB液体培养基 (北京索莱宝科技有限公司，catalog number: T1010)
9. 无菌 (含氨苄青霉素)LB液体培养基 (自制，T1010加5 g氨苄青霉素粉末)
10. TIANSeq HiFi Taq酶 (天根生化科技 (北京) 有限公司，catalog number: NG219)
11. 琼脂糖 (西班牙Biowest Agarose，北京索莱宝科技有限公司，catalog number: YZQZT)
12. TAE电泳缓冲液粉末 (北京索莱宝科技有限公司，catalog number: T1061)
13. 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 (天根生化科技 (北京)有限公司，catalog number: S7920)
14. 无内毒素质粒中量提取试剂盒 (离心柱型) (天根生化科技 (北京)有限公司，catalog number: S8031)
15. 普通DNA产物纯化试剂盒 (离心柱型)(天根生化科技 (北京)有限公司，catalog number: M2016M2016)
16. 去离子水 (18.2 MΩ·cm，由Milli-Q Gradient System制取)
17. OCT冰冻切片包埋剂 (SAKURA美国，catalog number: 4583-118ML)
18. 丙酮 (国药集团化学试剂北京有限公司，catalog number: A10000494)
19. Triton X-100 (北京索莱宝科技有限公司，catalog number: T8200)
20. 封闭山羊血清 (北京索莱宝科技有限公司，catalog number: SL038)
21. 荧光封片剂(含DAPI) (北京中杉金桥生物技术有限公司，catalog number: ZLI-9557)
22. PBS缓冲液 (pH 7.2-7.4) (北京索莱宝科技有限公司，catalog number: P1020)
23. LB营养琼脂琼平板 (含氨苄青霉素) (北京索莱宝科技有限公司，catalog number: L2010)
24. BamH1 (日本Takara公司，catalog number: 1010S)
25. Xho1内切酶 (日本Takara公司，catalog number: 1094S)
26. 3M 乙酸钠 (pH 5.2) (北京索莱宝科技有限公司，catalog number: A1070-100 ml)
27. SOC液体培养基 (干粉) (北京索莱宝科技有限公司，catalog number: L1020-1L)
28. BTX 电极杯 (北京沫之东生物技术有限公司，catalog number: YQ1633119185)
29. 1.5 ml Eppendorf管 (美国Axygen公司，catalog number: 24918079)
    

仪器设备

1. 电泳仪 (美国Bio-Rad公司)
2. 电转仪 (美国Bio-Rad公司)
3. 恒温培养箱 (美国Thermo Scientific公司)
4. 恒温细菌培养箱 (日本三洋公司)
5. 台式低温高速离心机 (德国Eppendorf公司)
6. 超低温冰箱 (青岛海尔股份有限公司)
7. 尼康共聚焦显微镜 (日本尼康公司，型号AR1)
8. 冰冻切片机 (德国徕卡公司，型号CM3050s)
9. 凝胶成像仪 (上海Tanon 1600)
   

实验步骤