Observation of Human-Derived (HEK 293) Exosomes by Transmission Electron Microscopy

实验原理

人源细胞（HEK 293）来源外泌体是一类粒径范围约为30 nm～150 nm，由人源细胞（HEK 293）分泌的具有磷脂双分子层结构的纳米级囊泡。负染技术是利用高原子序数重金属染料对外泌体颗粒背景进行染色，使外泌体形成高衬度明暗反衬成像的电镜制样技术。负染后的电镜图片无明显染料结晶、无大量团聚、无背景脏污、可用于形貌统计与粒径分析。

实验目的

观察人源细胞（HEK 293）来源外泌体的分散情况、完整形貌、颗粒结构及粒径大小。

材料与试剂

1. 精密移液枪（Eppendorf移液枪，量程覆盖0.5 μL～200 μL，使用配套原装吸头）
2. 无尘滤纸（Whatman 滤纸，吸液时需避免纤维脱落）
3. 封口膜（Parafilm PM996封口膜）
4. 生物级载网（中镜科仪商用铜网，规格200目或300目，连续碳膜或超薄碳膜）
5. 精密镊子（Dumont 镊子，尖端精细防磁，需定期清洗）
6. 超纯水（电阻率≥18.2 MΩ·cm，符合ASTM Type I 标准）
7. 磷酸盐缓冲液（国产分析纯试剂，pH 7.2～7.4）
8. 2%磷钨酸染色液（Sigma #P4006试剂，pH 6.8～7.2）
9. 1%醋酸铀染色液（Electron Microscopy Sciences #22400试剂）
   

仪器设备

1. 透射电镜（Hitachi HT7700，加速电压100kV，相机AMT XR81B 800万像素）
2. 高速低温离心机（Beckman Allegra X-30R，控温范围4 ℃～10 ℃）
3. 超速离心机（Beckman Optima MAX-X，控温范围4 ℃～10 ℃）
4. 辉光放电处理仪（MYCRO Harrick PDC-32G-2，处理气体类型为空气，放电功率10W～30W）
5. 冰箱（國產冷藏冷冻冰箱，-20 ℃～4 ℃）
   

实验步骤