摘要: 目的:通过表面等离子共振技术(SPR)的Dual进样模式表征中药来源活性小分子与靶标的异位协同作用。方法:将靶标蛋白以氨基偶联的方式固定在CM5芯片上,再利用Dual进样模式将分析物A、分析物B和AB混合物以不同的进样顺序流过CM5芯片表面,记录响应值的变化。结果:AB混合物的相对响应值大于单独进样分析物A和分析物B的相对响应值以及两者之和;进样分析物A或分析物B与靶标蛋白预结合,可对分析物A与分析物B的协同作用产生影响。结论:本文使用Dual进样模式以及两种活性分子的不同进样顺序与方式,通过比较相对响应值并计算协同系数,发现分析物A与分析物B之间存在协同互作。本实验方法可应用于判断活性小分子之间的协同互作关系,与其他分子互作技术相比,本文的实验方案具有实时、非标记、快速及互作信息更全面等多个优势。
材料与试剂
- PBS(10×)溶液(Cytiva,产品目录号:BR100672)
- Tween-20溶液(泰坦生物,产品目录号:G89190B)
- DMSO(泰坦生物,产品目录号:79527O)
- pH 5.5醋酸钠缓冲液(Cytiva,产品目录号:BR100352)
- 氨基偶联试剂盒(Cytiva,产品目录号:BR100050)
- Series S CM5芯片(Cytiva,产品目录号:29149603)
- 1.5 mL EP管(爱思进,产品目录号:MCT-150-C)
- 4 mL玻璃管(Thermo,产品目录号:4-SV)
- 橡胶帽(Cytiva,产品目录号:BR100411)
- 0.22 μm孔径滤膜(泰坦生物,产品目录号:FPE204030)
- 靶标蛋白偶联阶段选用的缓冲液为PBST(见溶液配方)
- 测试分析物阶段选用的缓冲液为300 mL含1.4% DMSO的PBST(见溶液配方)
- 溶剂校正溶液(见溶液配方)
仪器设备
- 分子互作分析仪(Cytiva,产品型号:Biacore T200)
- 实验室水纯化系统(Millipore,产品型号:Direct-8)
- 制冰机(Panasonic,产品型号:SIM-F149AY65-PC)
- 过滤装置(Thermo,产品型号:Ds0320-5033)
实验步骤
Copyright: © 2025 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:杨宇章, 陈锡祥, 徐见容. (2025). 基于Dual进样模式的中药来源活性小分子与靶标互作的异位协同表征. // Surface Plasmon Resonance (SPR) Protocol eBook.
Bio-101: e1011021. DOI:
10.21769/BioProtoc.1011021.
下载引用格式
How to cite: Yang. Y. Z., Chen, X. X. and Xu, J. R. (2025). Dual Injection Mode-based Characterization of Allosteric Synergistic Interactions between Target and Bioactive Small Molecules from Traditional Chinese Medicine. // Surface Plasmon Resonance (SPR) Protocol eBook.
Bio-101: e1011021. DOI:
10.21769/BioProtoc.1011021.
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