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利用SPR技术研究蛋白与小分子化合物相互作用的方法和解决方案

Strategy and Solution for the Studying of Protein-small Molecule Interaction by SPR Technology

曹 曹忠莲
杨 杨萍

发表时间: 2025年02月13日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1011018 浏览次数: 1718

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表面等离子体共振（SPR）技术实验手册
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摘要: 蛋白与小分子相互作用的研究方法多样，但利用基于表面等离子共振（SPR）技术的 Biacore T200 进行互作研究的方法报道甚少。本文以人血清白蛋白（Human Serum Albumin，简称HSA）和小分子法华林（Warfarin）的相互作用为例，详细描述了分子间相互作用的整个实验流程，包括实验前芯片、缓冲液的准备、HSA蛋白最佳偶联pH值的筛选、偶联过程、分析物Warfarin的芯片表面测试和再生条件的选择、HSA蛋白与Warfarin相互作用时多循环动力学测试、数据分析、实验结束后仪器的处理；同时，还对实验中出现的各种常见问题进行了剖析并提出相应的解决方案，包括仪器状态、传感芯片的选择、对偶联蛋白以及偶联量的要求、缓冲液的选择、非特异吸附的问题、再生试剂的选择以及再生效果的要求、数据拟合质量评价等。本文可为使用SPR技术研究蛋白与小分子化合物相互作用提供详实的参考。

Keywords: 表面等离子共振技术 search 蛋白与小分子化合物的相互作用 search 人血清白蛋白 search 法华林 search 方法和解决方案 search

材料与试剂

  1. 人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA）（Sigma-Aldrich，产品目录号：MFCD00081418）
  2. Warfarin (MedChemExpress，产品目录号：HY-B0687)
  3. Series S CM5芯片（Cytiva，产品目录号: BR-1005-30）
  4. 氨基偶联试剂盒（Cytiva，产品目录号: BR-1000-50）
  5. 10× HBS-EP+缓冲液（Cytiva，产品目录号: BR-1006-69）
  6. 醋酸钠缓冲液 (Cytiva, Acetate 4.0, 产品目录号: BR100349; Cytiva, Acetate 4.5, 产品目录号: BR100350; Acetate 5.0, 产品目录号: BR100351; Acetate 5.5, 产品目录号: BR100352)
  7. 50 mM NaOH溶液 (Cytiva，产品目录号: BR100358)
  8. 二甲基亚砜（Sigma，产品目录号: D-8418-50ML）
  9. 10× HBS-N缓冲液（Cytiva，产品目录号: BR-1006-70）
  10. BIAtest Solution with HBS-N (Cytiva，产品目录号: 210310)
  11. 1.5 mL 离心管（赛默飞QSP，产品目录号: 509-GRD-Q）

仪器设备

  1. 表面等离子共振仪（Cytiva, Biacore T200）
  2. Milli-Q纯水仪（Millipore，Milli-Q Integral Integral）

软件

  1. 运行软件: T200 Control Software（Cytiva, Version 3.2）
  2. 数据处理软件：Evaluation Software（Cytiva, Version 3.2）

实验步骤

Copyright: © 2025 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：曹忠莲, 杨萍. (2025). 利用SPR技术研究蛋白与小分子化合物相互作用的方法和解决方案. // Surface Plasmon Resonance (SPR) Protocol eBook. Bio-101: e1011018. DOI: 10.21769/BioProtoc.1011018.
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How to cite: Cao, Z. L. and Yang, P. (2025). Strategy and Solution for the Studying of Protein-small Molecule Interaction by SPR Technology. // Surface Plasmon Resonance (SPR) Protocol eBook. Bio-101: e1011018. DOI: 10.21769/BioProtoc.1011018.
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