Establishment of Inhibitor Screening and Validation System for Tryptophanyl tRNA Synthetase Using Surface Plasmon Resonance

材料与试剂

1. His-TrpRS和His-avitag (biotin)-TrpRS委托北京义翘神州科技有限公司合成
2. Surfactant P20（产品目录号：BR100054）
3. 10× HEPES-P（产品目录号：BR100671）和10× PBS-P（产品目录号：28-9950-84）缓冲溶液购自于美国Cytiva公司
4. 1 M Tris缓冲溶液（产品目录号：MC030.1）购自于中科迈晨（北京）商贸有限公司
5. 3 M NaCl水溶液（935418）购自于北京百灵威科技有限公司
6. 腺苷 5'-三磷酸盐（ATP）（产品目录号：A7699）和腺苷 3'-单磷酸盐（AMP）（产品目录号：A9272）购自于美国Sigma-Aldrich公司
7. 1 M PIPES水溶液（产品目录号：C4870），1 M MgCl₂水溶液（产品目录号：R0481）购买于美国Amresco公司
8. 吲哚霉素（产品目录号：15385）购自于美国Cayman公司
9. S系列SA芯片（产品目录号：BR100531）
10. 氨基偶联试剂盒（产品目录号：BR-1000-50）和NTA捕获试剂盒（产品目录号：28995056）均购置于美国Cytiva公司
11. 1.05× PBS-P缓冲溶液（见溶液配方）
12. 1.0× 含5% DMSO 缓冲溶液（见溶液配方）
13. 1.05× PBS-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂）（见溶液配方）
14. 1.05× PBS-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂和1.05 mM ATP）（见溶液配方）
15. 1.05× PBS-P缓冲溶液（含1.05 mM ATP）（见溶液配方）
16. 1.05× PBS-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂和1.05 mM AMP）（见溶液配方）
17. 1.05× PIPES-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂）（见溶液配方）
18. 1.05× PIPES-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂和1.05 mM ATP）（见溶液配方）
19. 1.05× HBS-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂）（见溶液配方）
20. 1.05× HBS-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂和1.05 mM ATP）（见溶液配方）
21. 1.05× TRIS-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂）（见溶液配方）
22. 1.05× TRIS-P缓冲溶液（含1.05 mM MgCl₂和1.05 mM ATP）（见溶液配方）
    

仪器设备

1. 表面等离子共振仪（美国Cytiva公司，Biacore T200 & 8K）

实验步骤