研究背景

表面等离子体共振（Surface plasmon resonance，SPR）是一种生物传感分析技术，可以用于研究中药活性成分与靶点在分子水平上的相互作用关系[1]。SPR技术凭借其出色的实时性、超高的灵敏度以及高专一性等特点，成为了中药活性成分发现的有力工具。在中药活性成分的表征鉴定、分子靶标的筛选、候选药物分子的优化改造以及药物质控等多个环节中，该技术均发挥着不可或缺的重要作用[2–6]。本试验方案以血管紧张素转换酶2（Angiotensin-converting enzyme 2，ACE2）为靶标蛋白，利用BiacoreT200系统，对6种中药进行活性成分筛选，并利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（Ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UHPLC-QTOF-MS）对筛选出的化合物进行分析鉴定，最终确定在葛根中筛选得到活性成分黄豆苷，通过SPR亲和力测定以及酶联免疫吸附实验（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）确证了其亲和力和生物活性。

材料与试剂

1. CM5芯片（Cytiva，catalog number: 29104988）
2. 氨基偶联试剂盒（Cytiva，catalog number: BR100633）
3. 10 mM醋酸钠缓冲液pH 4.0⁓5.5（Cytiva，catalog number: BR100349-52）
4. 50 mM NaOH溶液（Cytiva，catalog number: BR100358）
5. 10×HBS-EP+（Cytiva，catalog number: BR100669）
6. 10×PBS buffer（Cytiva，catalog number: BR100672）
7. 三氟乙酸（Adamas，catalog number: 81548K）
8. 碳酸氢铵（Sigma-Aldrich，catalog number: 09830-500G）
9. XBridge BEH C18色谱柱（130Å，2.5 µm，2.1 mm × 100 mm）（Waters，catalog number: 186006031）
10. 质谱纯甲醇（Supelco，catalog number: MX0490）
11. 质谱纯乙腈（Sigma-Aldrich，catalog number: L010100）
12. 质谱纯甲酸（Supelco，catalog number: FX0450）
13. 柴胡、甘草、葛根、桔梗、金银花、青连翘（上海长海医院）
14. 血管紧张素转化酶2（Sino-Biological，10108-H08H）
15. 重组人冠状病毒SARS-CoV-2刺突糖蛋白受体结合域（Active）（abcam，catalog number: ab273065）
16. 重组抗ACE2中和抗体（Sino-Biological，catalog number: 10108-MM37）
17. 黄豆苷（Tauto-Biotech，catalog number: RM-0024）
18. ELISA通用试剂盒（Biodragon，catalog number: BF06126-2）
    

仪器设备

1. 相互作用分析仪（Cytiva，model: BiacoreT200）
2. 液相色谱系统（Agilent，model: Agilent 1290 Infinity LC）
3. 飞行时间质谱仪（Agilent，model: Agilent 6538 UHD Q-TOF MS）
4. 超纯水制备系统（Millipore，model: Milli-Q A10）
   

实验步骤