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重组人源化抗VEGF单抗生物类似药与Fc受体的亲和力分析

Affinity Analysis of Recombinant Humanized Anti-VEGF Biosimilars with Fc Receptors

曹 曹忠莲
周 周维
张 张弛
杨 杨萍

发表时间: 2023年11月15日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1011004 浏览次数: 1725

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表面等离子体共振（SPR）技术实验手册
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摘要： 贝伐珠单抗（Avastin®）是罗氏公司于2004年获批上市的抗肿瘤血管生成药物，它通过特异性靶向血管内皮生长因子（VEGF）阻断与内皮细胞表面受体（Flt-1和KDR）的结合发挥抗肿瘤作用。但该药物对国内肿瘤患者造成极大的经济负担，因此，研发其生物类似药意义重大。Biacore T200利用表面等离子共振技术可实时、无标记地检测生物分子间的相互作用，表征分子间相互作用的动力学、亲和力等。因此，本试验方案利用该设备检测重组人源化抗VEGF单抗和阳性抗体Avastin与Fc受体FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32a，167His）、FcγRII（CD32a，167Arg）、FcγRII（CD32b）、FcγRIII（CD16a，176Phe）、FcγRIII（CD16a，176Val）、FcγRIII（CD16b）、FcRn的结合、解离情况以及亲和力值，以评价生物类似药与原研抗体药物在抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用即ADCC（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity）效应、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用即ADCP（antibody dependent cellular phagocytosis）效应以及抗体药物的半衰期方面是否具有生物等效性。实验结果显示：在本实验条件下，供试抗体重组人源化抗VEGF单抗和阳性抗体Avastin与Fc受体及FcRn（缓冲液pH 6.0和pH 7.4）的结合、解离常数以及亲和力值一致，说明重组人源化抗VEGF单抗生物类似药与阳性抗体贝伐珠单抗Avastin在发挥Fc效应方面具有生物等效性。

Keywords: 表面等离子共振技术 search 重组人源化抗VEGF单抗 search Fc受体 search 亲和力分析 search

材料与试剂

  1. 供试抗体重组人源化抗VEGF单抗 (东曜药业有限公司, 产品目录号: ADS20170601)
  2. 阳性抗体Avastin® (罗氏公司, 产品目录号: H0198B05)
  3. FcγRI (CD64) (ACRO Biosystems, 产品目录号: FCA-H52H2)
  4. FcγRIIa (CD32a, 167His) (Sino Biological, 产品目录号: 10374-H08H1)
  5. FcγRIIa (CD32a, 167Arg) (Sino Biological, 产品目录号: 10374-H08H)
  6. FcγRIIb (CD32b) (Sino Biological, 产品目录号: 10259-H08H)
  7. FcγRIIIa, (CD16a, 176Val) (Sino Biological, 产品目录号: 10389-H08H1)
  8. FcγRIIIa (CD16a, 176Phe) (Sino Biological, 产品目录号: 10389-H08H)
  9. FcγRIIIb (CD16b) (Sino Biological, 产品目录号: 11046-H08H)
  10. FcRn (ACRO Biosystems, 产品目录号: FCM-H5286)
  11. Series S CM5芯片（Cytiva，产品目录号: BR-1005-30）
  12. 氨基偶联试剂盒（Cytiva，产品目录号: BR-1000-50）
  13. 10× HBS-EP+ 缓冲液（Cytiva，产品目录号: BR-1006-69）
  14. 抗His标签抗体偶联试剂盒（Cytiva，产品目录号: 28-9950-56）
  15. 醋酸钠缓冲液 (Cytiva, Acetate 4.5, 产品目录号: BR100350; Acetate 5.0, 产品目录号: BR100351; Acetate 5.5, 产品目录号: BR100352)
  16. 50 mM NaOH溶液 (Cytiva，产品目录号: BR100358)
  17. BIAtest Solution with HBS-N (Cytiva，产品目录号: 210310)
  18. 96孔板 (Greiner-650101, 产品目录号: E15073K6)
  19. 96孔板封膜 (Cytiva，产品目录号: 2045469/17)
  20. HBS-EP+ 缓冲液 (见溶液配方)
  21. 供试抗体和阳性抗体的配制 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 生物分子相互作用仪 (Cytiva, Biacore T200)
  2. Milli-Q Advantage A10 超纯水系统（默克密理博，Merck Millipore）

实验步骤

Copyright: © 2023 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：曹忠莲, 周维, 张弛, 杨萍. (2023). 重组人源化抗VEGF单抗生物类似药与Fc受体的亲和力分析. // Surface Plasmon Resonance (SPR) Protocol eBook. Bio-101: e1011004. DOI: 10.21769/BioProtoc.1011004.
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How to cite: Cao, Z. L., Zhou, W., Zhang, C. and Yang, P. (2023). Affinity Analysis of Recombinant Humanized Anti-VEGF Biosimilars with Fc Receptors. // Surface Plasmon Resonance (SPR) Protocol eBook. Bio-101: e1011004. DOI: 10.21769/BioProtoc.1011004.
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