材料与试剂

实验耗材

1. 15 ml离心管（Corning，catalog number：430791）
2. 18-G卵泡吸取针（Olympus，catalog number：G19715）
3. 移液枪(Eppendorf)
4. 40 μm过滤器（FALCON，catalog number：352340）
5. 3.5 cm培养皿（Coring，catalog number：430165）
6. 6 cm培养皿（Coring，catalog number：430166）
7. 10 cm培养皿（Coring，catalog number：430167）
8. 口吸管（北京正天，catalog number：BJ-40）
9. 毛细玻璃管（Sutter Instrument，catalog number：B100-75-10）

1. 0.25% Trypsin-EDTA（Gibco,catalog number：25200-072）
2. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)（Gibco，catalog number：11965-092）
3. Dimethylsulfoxide (DMSO)（Sigma，catalog number：D2650）
4. PVP（Sigma，catalog number：PVP360）
5. 细胞松弛素 B（cytochalacin B）（Sigma，catalog number：C6762）
6. Fusogenic viral envelop (HVJ-E) (COSMO BIO CO. LTD)
7. Ionomycin（碧云天，catalog number：S1672）
8. 6-Dimethylaminopurine（Sigma，catalog number：D2629）
9. 矿物油（Sigma，catalog number：M8410）
10. 肝素钠（上海三杰，catalog number：091201）
11. Hyaluronidase（Sigma，catalog number：H3884）
12. PBS（Gibco，catalog number：10010-023）
13. Tyrode's Albumin Lactate Pyruvate medium with HEPES (TH3) （见溶液配方）
14. Hamster embryo culture medium-9 (HECM-9)（见溶液配方）
15. CMRL-1066（见溶液配方）
16. 成纤维细胞培养基（见溶液配方）

仪器设备

1. 振荡器 （Kylin-Bell Lab Instruments, catalog number：QH-600）
2. 腹腔镜系统
3. 腹腔镜（Olympus, model：OVT-SC2）
4. 光源（Olympus,model：CLH-250）
5. 显示器（Sony）
6. 负压吸卵系统（Cook）
7. 管式加热器（Cook）
8. 体视显微镜(Olympus，model：SZX7)
9. 倒置显微镜(Olympus,model：IX-83).
10. 培养箱（Thermo Scientific，model：Forma 3111、Forma 371）
11. 离心机 (Eppendorf centrifuge，model：5702 )
12. 拉针仪(Sutter Instrument，model：P97)
13. 锻针仪(Narishige,model：MF-900)
14. 磨针仪 (Narishige,model：EG-400)
15. 激光系统(Hamilton Thorne)
16. 压电冲击驱动系统(Prime Tech).
17. 纺锤成像显微系统(Oosight)
18. 显微操作臂(Narishige)
19. 微量注射器（Narishige IM-9B）
    

实验步骤