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猴胞浆内单精子注射

Intracytoplasmic Sperm Injection of Monkeys

王 王燕
许 许玉婷
李 李春杨
孙 孙强

发表时间: 2023年03月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010985 浏览次数: 1264

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实验动物胚胎操作实验手册
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摘要：胞浆内单精子注射（Intracytoplasmic Sperm Injection，ICSI），是指通过显微操作技术将单个精子注入卵母细胞胞浆内，从而使卵母细胞受精的一种辅助生殖技术。与传统的体外受精相比，ICSI对精子活力、数量及受精能力的要求较低，在临床上是第 2 代“试管婴儿”的关键技术。在科研领域，ICSI 可结合其他生物工程技术，制备基因编辑动物模型。此外 ICSI 也是精子冷冻复苏构建受精胚胎的重要辅助手段。本文详细描述了猴胞浆内单精子注射的操作方法及流程。

Keywords: 精子 search 卵母细胞 search 受精 search 辅助生殖 search

材料与试剂

  1. 3.5 cm 培养皿（CORNING，catalog number: 430165）
  2. 3.5 cm 操作皿（FALCON，catalog number: 353001）
  3. Borosilicate Glass（B100-75-10）
  4. 矿物油（Sigma，catalog number：M8410）
  5. 口吸管（北京正天，catalog number：BJ-40）
  6. 移液枪 （Eppendorf）
  7. 15 ml 离心管（Corning，catalog number：430791）
  8. 一次性使用无菌注射器带针（KDL 1ml）
  9. PVP（Sigma，catalog number：PVP360）
  10. 水银
  11. TH3液（见溶液配方）
  12. T3液（见溶液配方）
  13. HECM9aa培养液（见溶液配方）
  14. NaCl（Sigma-Aldrich，catalog number：S7653）
  15. KCl（Sigma-Aldrich，catalog number：P5405）
  16. CaCl2·2H2O（Sigma-Aldrich，catalog number：C7902）
  17. MgCl2·6H2O（Sigma-Aldrich，catalog number：M2670）
  18. NaH2PO4（Sigma-Aldrich，catalog number：S8282）
  19. NaHCO3（Sigma-Aldrich，catalog number：S5761）
  20. HEPES（Sigma-Aldrich，catalog number：H3375）
  21. D-Glucose（Sigma-Aldrich，catalog number：G7528）
  22. Sodium Pyruvate（Sigma-Aldrich，catalog number：P5280）
  23. Sodium lactate (60% syrup)（Sigma-Aldrich，catalog number：L4263）
  24. BSA（absin，catalog number：abs9156）
  25. penicillin-streptomycin (100X)（gibco，catalog number：15070-063）
  26. PVA（Sigma-Aldrich，catalog number：P8136）
  27. HCl（沪试，catalog number：7647-01-0）
  28. Taurine（Sigma-Aldrich，catalog number：T8691）
  29. Asparagine（Sigma-Aldrich，catalog number：A4159）
  30. Cysteine（Sigma-Aldrich，catalog number：C7352）
  31. Histidine（Sigma-Aldrich，catalog number：H6034）
  32. Lysine（Sigma-Aldrich，catalog number：L5501）
  33. Proline（Sigma-Aldrich，catalog number：L5607）
  34. Serine（Sigma-Aldrich，catalog number：S4311）
  35. Aspartic acid（Sigma-Aldrich，catalog number：A8949）
  36. Glycine（Sigma-Aldrich，catalog number：G8790）
  37. Glutamic acid（Sigma-Aldrich，catalog number：G8415）
  38. Glutamine（Sigma-Aldrich，catalog number：G8540）
  39. Pantothenate（Sigma-Aldrich，catalog number：P5155）
  40. Phenol Red（Sigma-Aldrich，catalog number：P0290）

仪器设备

  1. 培养箱（Thermo Scientific，model：Forma 3111、Forma 371）
  2. 拉针仪（Sutter Instrument，model：P97）
  3. 断针仪（Narishige，model：MF-900）
  4. 倒置显微镜（Olympus，model：IX-73）
  5. 体视显微镜（Olympus，model：SZX7）
  6. 一对显微操作臂（Narishige）
  7. 微量注射器（Narishige IM-9B）
  8. 离心机（Eppendorf centrifuge，model：5702）
  9. 压电冲击驱动系统（Prime Tech）

实验步骤

Copyright: © 2023 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王燕, 许玉婷, 李春杨, 孙强. (2023). 猴胞浆内单精子注射. // 实验动物胚胎操作实验手册. Bio-101: e1010985. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010985.
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How to cite: Wang, Y., Xu, Y. T., Li, C. Y., and Sun, Q. (2023). Intracytoplasmic Sperm Injection of Monkeys. // Embryo Manipulation Manual of Laboratory Animals. Bio-101: e1010985. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010985.
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