研究背景

利用胎儿成纤维细胞、卵丘细胞或成体成纤维细胞进行体细胞克隆，已成功地培育了各种克隆哺乳动物。关于哪种供体细胞最适合SCNT有很多讨论，但一般认为未分化的供体细胞（即胚胎卵裂球）更适合用于SCNT。此外，由于胎儿成纤维细胞具有高增殖率，因此被广泛用于生产转基因克隆动物。因此，胎儿成纤维细胞被认为是在几个物种中产生克隆后代的最合适的供体细胞。然而，犬和猫的第一个克隆后代分别来自成体皮肤成纤维细胞和卵丘细胞。

材料与试剂

1. DMEM（Hyclone）
2. FBS（Gibco）
3. 丙酮酸钠（Gibco）
4. 谷氨酰胺（Gibco）
5. NEAA（Gibco）
6. 质粒（Addgene）
7. G418（Merk）
8. 电转液（Neon Transfection System 100μL Kit）
9. 胰酶（Gibco）
10. 克隆环（国产）
11. 培养板（Corning）
    

仪器设备

1. 电转仪（Invitrogen Neon）
2. 培养箱（Thermo-4111）
3. 生物安全柜（ESCO-AC2-6S1）
4. 倒置显微镜（Olympus-IX73）
   

实验步骤