材料与试剂

1. M199（Invitrogen）
2. FBS（Gibco）
3. 异氟烷（瑞沃德）
4. 手术器械（国产）
5. 手术创巾（国产）
6. 双抗P/S（Gibco）
7. 生理盐水（格美研）
8. 胚胎移植管（Kendall）
9. 口吸管（自制）
10. 玻璃管（国产）
11. 培养皿（Corning）
    

仪器设备

1. 体视显微镜（Olympus）

实验背景

由于犬独特生殖生物学特性，其辅助生殖技术一直发展很缓慢。犬的一个生殖周期，包括大约1周的发情前期和发情期，随后是2个月的间情期。间期之后是一个可变的（2-10个月）乏情期，导致每年只能排卵1-2次。尽管数十年来一直在研究驱使发情的传统生殖激素（促性腺激素、雌二醇、孕酮），但对乏情期的可变持续时间和最终终止浓度并不清楚。科研人员曾多次尝试诱导犬的发情，但结果各不相同。例如，注射外源性卵泡刺激素（FSH）用于刺激卵泡生长。多巴胺激动剂和促性腺激素释放激素激动剂等被用来通过刺激促性腺素释放来诱导发情。后两种处理类型在大多数研究中都成功诱导了发情，但其有效性高度依赖于激素处理时的生殖周期阶段，对于GnRH激动剂，长期处理会导致抑制发情的效果。因此，虽然已经在犬身上尝试了许多不同的发情诱导技术，但很少取得一致的结果。
发情行为开始后，LH峰后两天，一个生发泡期卵母细胞会排到输卵管中，并在输卵管中额外48-72小时才能成熟（MII）并可受精。这种时间安排的进化优势在犬类和其他哺乳动物之间不同的原因目前尚不清楚。此外，卵母细胞延迟成熟的机制尚不清楚，尽管有人认为卵丘细胞与排卵卵母细胞的长期紧密结合有关。然而，试图在体外重演这一成熟过程的尝试总的来说效率非常低。关于犬体外卵母细胞成熟（IVM）的研究很多，但总体效果都很差。
目前，胚胎移植主要通过手术的方法，包括自体移植和异体移植，其中自体移植是指将自身的胚胎从体内取出，在体外处理后再移植回自身体内的过程；异体移植是指将体内取出的胚胎移植到另一只处于同一发情阶段的受体母犬体内的过程。移植部位的选择取决于胚胎的发育阶段，要么转移到输卵管要么转移到子宫角。输卵管更适合早期胚胎（<8细胞），而输卵管移植到子宫角在技术上更简单，更适合晚期胚胎（>8细胞期）。

实验步骤