Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

猪体细胞核移植

Porcine Somatic Nuclear Transfer

樊 樊娜娜
欧 欧阳振
王 王教伟
赵 赵宇
赖 赖良学

发表时间: 2022年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010968 浏览次数: 2636

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实验动物胚胎操作实验手册
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摘要: 体细胞核移植是指将体细胞细胞核利用显微操作的方法移入去核卵母细胞，构建成重组胚胎，经过一段时间的体外培养，移植到代孕受体内，产生与供体细胞相同基因型后代的技术过程，又称之为动物克隆技术。猪体细胞核移植主要包括以下步骤：供体细胞的准备、卵母细胞的体外成熟、成熟卵母细胞的去核、供核细胞核转移、重构胚胎激活。

Keywords: 猪 search 体细胞核移植 search 卵母细胞的体外成熟 search 成熟卵母细胞的去核 search 供核细胞核转移 search 重构胚胎激活 search

材料与试剂

  1. 四孔板（NUNC）
  2. 24孔板（NUNC）
  3. 六孔板（NUNC）
  4. 培养皿（NUNC）
  5. 1.0 mm×0.6 mm玻璃管（WPI）
  6. 1.0×0.8 mm玻璃管（WPI）
  7. 2.5×2.0 mm玻璃管（WPI）
  8. DMEM （Gibco, catalog number: 11965-0982）
  9. FBS（Gibco, catalog number: 10099141C）
  10. NEAA（Gibco, catalog number: 11140050）
  11. GlutaMAX（Gibco, catalog number: 35050061）
  12. DMSO（Sigma, catalog number: D8779）
  13. CollagenaseIV（Sigma, catalog number: C5138）
  14. 0.05% 胰酶（Gibco, catalog number: 25300062）
  15. 75% 酒精（安徽安特生物化学有限公司） 
  16. DPBS (Gibco, catalog number: D8537) 
  17. 0.9% 生理盐水（衡阳制药有限公司）
  18. 石蜡油（Sigma, catalog number: M5310）
  19. NaCl（Sigma, catalog number: S5886）
  20. KCl（Sigma, catalog number: P4504）
  21. NaHCO3（Sigma, catalog number: S8875）
  22. NaH2PO4（Sigma, catalog number: S5011）
  23. MgCl2·6H2O（Sigma, catalog number: M0250）
  24. Hepes （Sigma, catalog number: H3784）
  25. Penicillin（Sigma, catalog number: P3032）
  26. phenol Red（Sigma, catalog number: 5530）
  27. CaCl2·2H2O（Sigma, catalog number: C7902）
  28. Polyvinyl alcohol（PVA Sigma, catalog number: P8136）
  29. Sorbitol（Sigma, catalog number: S1876）
  30. Gentamicin（Sigma, catalog number: G1264）
  31. Sodium pyruvate（Sigma, catalog number: P4562）
  32. H2O（Sigma, catalog number: W-1503）
  33. Na Lactate（Sigma, catalog number: L7900） 
  34. TCM-199（Gibco, catalog number: 11150-059）
  35. D-glucose（Sigma, catalog number: G7021）
  36. Penicillin（Sigma, catalog number: P3032）
  37. Streptomycin（Sigma, catalog number: S1277）
  38. Luteinizing hormone（LH Sigma, catalog number: L5269）
  39. Epidermal growth factor（EGF Sigma, catalog number: S4127）
  40. Follicle stimulating hormone（FSH Sigma, catalog number: F2293）
  41. Cysteine（Sigma, catalog number: C8152） 
  42. Hyaluronidase（Sigma, catalog number: H3506） 
  43. Mannitol（Sigma, catalog number: M9647）
  44. BSA（Sigma, catalog number: A8022） 
  45. Cytochalasin B（Sigma, catalog number: C6762） 
  46. Mannitol（Sigma, catalog number: M9647）
  47. KH2PO4（Sigma, catalog number: P-5655）
  48. MgSO4·7H2O（Sigma, catalog number: M1880）
  49. Na-Pyruvate（Sigma, catalog number: 4562）
  50. Ca.(Lactate)2·5H2O（Fisher, catalog number: C110-500）
  51. L-Glutamine（Sigma, catalog number: G-7029）
  52. Hypotaurine（Sigma, catalog number: H-1384）
  53. NEAA（Sigma, catalog number: M7145）
  54. EAA（Sigma, catalog number: B-6766）

仪器设备

  1. CO2培养箱（THERMO-3111）
  2. 超净工作台（瑞智净化）
  3. 倒置显微镜（OLYMPUS-IX51）
  4. 体式显微镜（NIKON-SMZ645）
  5. 显微镜加热台（THERMO）
  6. 显微操作系统（NIKON-NT-88-V3）
  7. 融合仪（BLS- CF-150B）
  8. 拉针仪（日本成茂）
  9. 断针仪（日本成茂）
  10. 磨针仪（日本成茂）
  11. 恒温胚胎运输箱（FHK，NFA451）
  12. 恒温水浴锅（上海一恒）
  13. 天子天平（赛多利斯- BS224S）
  14. PH计（赛多利斯-PB-10）
  15. 磁力搅拌器（科迪- DJ-1A）
  16. 冰点渗透压仪（GONOTEC）
  17. -20 ℃冰箱（海尔）
  18. -80 ℃冰箱（THERMO）
  19. 移液枪（EPPENDORF）
  20. 电动移液器（THERMO）
  21. 离心机（中科科仪-SC-3610）

实验步骤

Copyright: © 2022 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：樊娜娜, 欧阳振, 王教伟, 赵宇, 赖良学. (2022). 猪体细胞核移植. // 实验动物胚胎操作实验手册. Bio-101: e1010968. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010968.
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