材料与试剂

1. 四孔板（NUNC）
2. 培养皿（NUNC）
3. 2.5×2.0mm玻璃管（WPI）
4. BSA（Sigma，catalog number: A8022）
5. NaHCO₃（Sigma，catalog number: S-8875）
6. Na-Pyruvate（Sigma，catalog number: 4562）
7. HEPES (Na-Salt)（Sigma，catalog number: H3784）
8. HEPES (Acid) （Sigma，catalog number: H4034）
9. L-Glutamine（Sigma，catalog number: G-7029）
10. TCM 199 [10x] （Sigma，catalog number: M0650）
11. H₂O（Sigma，catalog number: W1503）.
12. NaCl（Sigma，catalog number: S-5886）
13. KCl（Sigma，catalog number: P-4504）
14. NaH₂PO₄（Sigma，catalog number: S-5011）
15. MgSO₄（Sigma，catalog number: M-2343）
16. CaCl₂·2H₂O（Sigma，catalog number: C-7902）
17. Na Lactate（Sigma，catalog number: L7900）
18. Caffein (Sigma，catalog number: C-0750)
19. KH₂PO₄（Sigma，catalog number: P-5655）
20. MgSO₄·7H₂O（Sigma，catalog number: M-1880）
21. Ca.(Lactate)₂·5H₂O（Fisher，catalog number: C110-500）
22. Hypotaurine（Sigma，catalog number: H-1384）
23. NEAA（Sigma，catalog number: M7145）
24. EAA（Sigma，catalog number: B-6766）
25. Gentamicin（Gibco，catalog number: 15710-064）
26. 75% 酒精（安徽安特生物化学有限公司） 
27. DPBS (Gibco D8537) 
28. 0.9% 生理盐水（衡阳制药有限公司）
29. 石蜡油（Sigma，catalog number: M5310）
    

仪器设备

1. 培养箱（THERMO-3111）
2. 超净工作台（瑞智净化）
3. 体式显微镜（NIKON-SMZ645）
4. 显微镜加热台（THERMO）
5. 移液枪（EPPENDORF）
   

实验步骤