材料与试剂

1. 四孔板（NUNC），
2. 1.0 mm × 0.6 mm玻璃管（WPI）
3. 1.0 ×0.8 mm玻璃管（WPI）
4. 2.5 × 2.0 mm玻璃管（WPI）
5. TCM-199（Gibco，catalog number: 11150-059）
6. NaHCO₃（Sigma，catalog number: S4019）
   
7. Hepes（Sigma，catalog number: H3784）
8. Penicillin（Sigma，catalog number: P3032）
9. Streptomycin（Sigma，catalog number: S1277） 
10. NaCl（Sigma，catalog number: S5886）
11. H₂O（Sigma，catalog number: W-1503）
12. KCl（Sigma，catalog number: P-4504）
13. KH₂PO₄（Sigma，catalog number: P-5655）
14. MgSO₄·7H₂O（Sigma，catalog number: M-1880）
15. Na-Pyruvate（Sigma，catalog number: 4562）
16. Ca.(Lactate)₂·5H₂O（Fisher，catalog number: C110-500）
17. L-Glutamine（Sigma，catalog number: G-7029）
18. Hypotaurine（Sigma，catalog number: BH-1384）
19. NEAA（Sigma，catalog number: M7145）
20. EAA（Sigma，catalog number: B-6766）
21. Gentamicin （Gibco，catalog number: 15710-064）
22. BSA（Sigma，catalog number: A8022）
    

仪器设备

1. CO₂培养箱（THERMO-3111）
2. 超净工作台（瑞智净化）
3. 倒置显微镜（OLYMPUS-IX51）
4. 体式显微镜（NIKON-SMZ645）
5. 显微镜加热台（THERMO）
6. 显微操作系统（NIKON-NT-88-V3）
7. 拉针仪（日本成茂）
8. 天子天平（赛多利斯- BS224S）
9. PH计（赛多利斯-PB-10）
10. 磁力搅拌器（科迪- DJ-1A）
11. 冰点渗透压仪（GONOTEC）
12. -20 °C冰箱（海尔）
13. -80 °C冰箱（THERMO）
14. 移液枪（EPPENDORF）
15. 电动移液器（THERMO）
16. 离心机（中科科仪-SC-3610）
    

实验步骤