摘要: 【原理】鸟类的性别决定为遗传性别决定(genotypic sex determination, GSD),雌性为ZW异配型(heterogametic)性染色体,雄性为ZZ同配型(homogametic)性染色体,利用Z和W染色体上CHD基因内含子序列存在的差异,通过设计特异的引物可以快速准确地鉴定鸡胚胎的性别。【目的】鸡是最常用的研究鸟类性别决定和性别分化的动物模型,同时鸡胚也是胚胎学和发育生物学重要的研究模型之一,鸡胚性别与其经济价值有着直接的联系。因此,鸡胚胎快速的鉴定性别不仅在科研方面具有重要的意义,在实际生产中也具有重要的经济价值。【方法】我们描述了一种鸡胚性别鉴定方法,即可以快速鉴定鸡胚任意发育时期分离的组织或细胞的性别,也可以在不影响鸡胚发育的情况在鸡胚出壳前完成鉴定,即通过特异的引物,以组织、细胞或鸡胚发育后期取出的尿囊液作为模板,选择Z和W染色体上同源基因CHD(CHD-Z和CHD-W)的序列设计引物,通过PCR扩增和凝胶电泳,雌性(ZW)会出现两条大小不一的条带,而雄性(ZZ)则只有一条。【结果】以胚胎血液,尿囊液和组织作为模板进行鉴定,与解剖结果比对后,结果显示通过此方法可以在1小时之内准确的鉴定出鸡胚的性别,其准确率为100%。【结论】这项技术能够快速的鉴别胚胎,胚胎组织或细胞的性别,为后续的处理提供参考。
材料与试剂
- 1.5 ml EP管(AXYGEN,Lot No. 23719392)
- PCR管(AXYGEN,Lot No. 30217302)
- 10 μl微量移液器枪头(AXYGEN,Lot No. 32119391)
- MightyAmpTM DNA Polymerase Ver.3(TAKARA, Code No.R076A),-20 °C保存
- 2× MightyAmp Buffer Ver.3(TAKARA, Code No.R076A),-20 °C保存
- Premixed TAE Buffer, 10x(Sigma-Aldrich,catalog number: 11666690001),常温保存
- 溴化乙锭(Ethidium bromide,EB)(Sigma-Aldrich,catalog number: E7637),常温保存
- 琼脂糖(Agarose)(Sigma-Aldrich,catalog number: A9539),
- DL 5000 DNA Marker(TAKARA, Code No.3428A),4℃保存
- 10x Loading Buffer(TAKARA, Code No.9157),常温保存
- 50x TAE 缓冲液(Solarbio,catalog number: T1060),常温保存
- 1× PBS缓冲液(Solarbio,catalog number: P1020),常温保存
- Chicken-CHD 引物(由Invitrogen上海公司合成部合成)
- 酒精
- 蒸馏水
仪器设备
- 镊子
- 2 μl微量移液器(Eppendorf,Eppendorf Reference® 2, catalog number: 4921000028)
- 10 μl微量移液器(Eppendorf,Eppendorf Reference® 2, catalog number: 4921000052)
- PCR管离心机(Eppendorf,MiniSpin® plus 5, catalog number: 452000093)
- PCR仪(Applied Biosystems,型号:2720)
- 微波炉(Galanz,型号:P7021T9-6)
- 分析天平(METTLER TOLEDD,型号:AL204)
- 电泳仪(北京六一仪器厂,型号:DYY6C)
- 显像仪(Bio-Rad ChemiDocTM Imaging System,733BR2897)
- 去离子水仪(Sartorius,Arium®Pro)
- 孵化箱(无锡设备厂,鸣凤4820型)
实验步骤
Copyright: © 2022 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
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