鸡胚血管注射

靳锴; 左其生; 张亚妮; 李碧春

doi:10.21769/BioProtoc.1010955

Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

鸡胚血管注射

Intravascular Injection of Chicken Embryos

发表时间: 2022年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010955 浏览次数: 1816

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摘要:【原理】鸟类卵生的特点使其成为研究恒温动物的良好模型，其胚胎独立发育在体外，在孵化的24 h之后，血液循环已经建立，此阶段可将外源物质通过胚胎血液循环系统导入胚胎，用以研究外源物质的功能作用[1]。【目的和方法】本研究拟通过显微操作联合鸡胚血管注射探索将外源物质导入鸡胚的方法，为基因功能验证，转基因育种和嵌合体制备等生产研究提供方法。【结果】结果显示，示踪剂表明通过背主动脉和头部血管注射能够使注射物通过血液循环系统扩散至整个胚胎。胚胎荧光观察结果表明血管注射能够有效的将外源质粒和慢病毒载体导入胚胎，切片结果证明外源PGCs能够通过注射有效的进入受体生殖腺。【结论】这项技术能够为基因功能验证，胚胎和发育生物学研究，嵌合体和转基因鸡的制备提供基础技术支持。

Keywords: 血管注射

鸡胚

鸡PGCs

转基因鸡制备

材料与试剂

玻璃针 (NARISHIGE, catalog number: G-1)
微量上样枪头, Microloade (Eppendorf, catalog number: H129975M)
医用胶带
DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) (Gibco®, catalog number: 11960044)
PBS, pH 7.4 (Phosphate-Buffered Saline) (Gibco®, catalog number:10010023)
0.4%台盼蓝染液 (Trypan Blue solution) (Sigma-Aldrich, catalog number:T8154)
PEI (Polyfectine) (Biowit, catalog number: PL0001)
青链霉素 (Solarbio, catalog number: P1400)
灭菌蒸馏水

仪器设备

手术镊
眼科镊
拉针仪 (NARISHIGE, model: PC-100)
磨针仪 (NARISHIGE, model: EG-401)
37 °C培养箱 (Thermo scientific, model: 4110)
体视显微镜 (OLYMPUS, model: MVX10)
10 μl微量移液器（Eppendorf，Eppendorf Reference® 2, catalog number: 4921000052）
显微注射仪 (NARISHIGE, model: UT10)
孵化箱(无锡设备厂，型号：鸣凤4820型)

实验步骤

引用格式：靳锴, 左其生, 张亚妮, 李碧春. (2022). 鸡胚血管注射. // 实验动物胚胎操作实验手册. Bio-101: e1010955. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010955.

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How to cite: Jin, K., Zuo, Q. S., Zhang, Y. N. and Li, B. C. (2022). Intravascular Injection of Chicken Embryos. // Embryo Manipulation Manual of Laboratory Animals. Bio-101: e1010955. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010955.

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