材料与试剂

（一）材料

1. 手术器械
   系线镊（协和, MR-F201A）
   弯嘴眼科镊（施强, JYN1030）
   小血管剪（金钟, JA2405）
   止血夹（灵涛, LW0080）
   缝合钳（三友, SY11Cr）
   带线缝合针（双箭, YY0166-2002）
2. 注射针（带芯毛细玻璃管，SUTTER INSTRUMENT BF100-78-10）
3. 微量注射枪头（Eppendorf Microloader货号：5242956003）
4. 固定针（无芯毛细玻璃管，SUTTER INSTRUMENT B100-75-10）
5. 吸卵针（国产毛细管，规格0.9-1.1×120 mm）
6. 培养皿（FALCON 353001、353002）

1. FHM小鼠胚胎培养液（MILLIPORE公司，产品目录号：MR-025-D）
2. KSOM小鼠胚胎培养液（MILLIPORE公司，产品目录号：MR-121-D）
3. 矿物油（SIGMA M8410）
4. 透明质酸酶（SIGMA H3506 ）
5. 孕马血清PMSG（宁波三生）
6. 人绒毛膜促性腺激素HCG（宁波三生）
7. 细胞松弛素CB（SIGMA C6762）
8. 二甲基亚砜细胞冻存液DMSO（SIGMA D2650）
9. 2,2,2-Tribromoethanol（SIGMA-ALDRICH T48402）
10. 2-Methyl-2-butanol（SIGMA 240486）
11. ULTRA PURE WATER（MILLIPORE TMS-006-A）
12. PMSG（见溶液配方）
13. HCG（见溶液配方）
14. 2.5%阿佛丁麻醉剂（见溶液配方）
15. CB-HCZB（见溶液配方）

1. 供体雌鼠（C57BL/6J、3-4周）
2. 供体雄鼠（C57BL/6J、大于8周）
3. 假孕雌鼠（ICR、大于6周）
4. 结扎雄鼠（ICR、大于6周）

仪器设备

1. 拉针仪（SUTTER INSTRUMENT P-97）
2. 煅针仪（NARISHIGE MF-900）
3. 实体镜（NIKON SMZ800N）
4. 倒置显微镜（OLYMPUS IX73）
5. 显微操作系统（NARISHIGE IM-9C）
6. 离心机（eppendorf 5430）
7. CO₂恒温培养箱（Thermo i160）
8. 超洁净工作台（万里 SW-CJ-2FX）
9. 热台
10. 磁力搅拌器（CORNING PC-420D）
    

实验步骤