Primordial Germ Cells Transplantation or Replacement in Zebrafish

材料与试剂

1. 玻璃吸管（友乐博, 货号: UTP1007）
2. 90 mm塑料平皿（海门, 货号: HC030）
3. 野生型斑马鱼（国家斑马鱼资源中心，CZRC）
4. 琼脂糖粉末（BIOWESTE, catalog number: 111860）
5. NaCl（国药, 货号: 10019318）
6. KCl（国药, 货号: 10016318）
7. MgSO₄∙7H₂O（国药, 货号: 10013018）
8. Ca(NO₃)₂∙4H₂O（阿拉丁, 货号: C100076）
9. HEPES（Sigma-Aldrich, 货号: H7523）
10. 青链霉素双抗（Gibco, catalog number: 15140-122）
11. 酚红（Sigma-Aldrich, catalog number: P3532）
12. dead end吗啉反义寡核苷酸（dnd MO）（订购自Gene Tools公司）
13. GFP-UTRnos3 mRNA，cas9-UTRnos3 mRNA，buc mRNA，pou5f3 gRNA（自备）
14. 30× Danieau's buffer（见溶液配方）
    

仪器设备

1. 250 mL锥形瓶（蜀牛, 货号: RZXP-0250）
2. 1 mL医用注射器（金塔, 货号: JT-001）
3. 移植用平皿制备模具（Adaptive Science Tools, 货号: PT-1）
4. 玻璃毛细管，显微注射用（WPI, 货号: W100F-4）
5. 玻璃毛细管，细胞移植用（WPI, 货号: TW100-4）
6. 显微注射仪（WPI, model: PV820）
7. 拉针仪（Sutter Instrument, model: P1000）
8. 煅针仪（Narishiga, model: MF-900）
9. 磨针仪（Narishiga, model: EG-400）
10. 油压细胞移植器（Eppendorf, model: CellTram vario）
11. 显微操作仪（Narishiga, model: MMN-2）
12. 光学体视显微镜（Olympus, model: SZ61）
13. 体视荧光显微镜（Olympus, model: MZX7）
14. 台式离心机（ThermoFisher, model: Pico17）
15. 恒温培养箱（精宏，型号：HWS-080）
    

实验步骤