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高内涵成像分析系统用于类器官蛋白表达分析

Using high-content Screening Analysis System to Analyse the Expression and Distribution of Certain Protein in Stomach Organoid

李 李鹏飞

发表时间: 2022年02月24日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010889 浏览次数: 2175

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高内涵成像及分析实验手册
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摘要：类器官 (Organoid) 是源自多能干细胞或器官祖细胞的体外衍生3D细胞聚集体，有自我更新、自我组织能力且具有完整器官结构和功能 (Lancaster and Knoblich, 2014)。自报道来(Sato and Vries, 2009)，类器官得到了广泛关注，培养技术日趋成熟，正成为药物筛选、个性化治疗和理解人体器官的重要模型。与2D细胞相比，3D类器官保留了原器官组织结构和生物信息，已被证明为目前最接近体内生理环境和临床相似度最高的体外研究模型。建立成熟的类器官模型，并验证类器官模型的可靠性，是类器官相关研究的重要步骤，本文简要介绍了人胃类器官模型的构建过程，并利用高内涵成像分析系统成像和分析F-actin蛋白的极性分布，该蛋白的极性分布是胃类器官建立成功的重要标记之一。

Keywords: 高内涵 search 类器官 search F-actin search 3D分析 search

材料与试剂

  1. 96孔板 (PerkinElmer，96 CellCarrier ultra)
  2. 人源组织保存液 (京创和益, catalog number: CH-0001A)
  3. 人胃类器官培养基 (京创和益, catalog number: CH-0302A)
  4. Advanced DMEM/F12 (Thermo Fisher Scientific, catalog number: 12634010)
  5. HEPES (Thermo Fisher Scientific, catalog number: 15630080)
  6. UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0 (Thermo Fisher Scientific, catalog number: 15575020)
  7. Penicillin-Streptomycin (Thermo Fisher Scientific, catalog number: 15140122)
  8. Primocin (InvivoGen, catalog number: ant-pm-1)
  9. GlutaMAX Supplement (Thermo Fisher Scientific, catalog number: 35050061)
  10. Matrigel BD (Biosciences, catalog number: 356231)
  11. B-27 Supplement (Thermo Fisher Scientific, catalog number: 17504001)
  12. N-Acetyl-L-cysteine (Sigma-Aldrich, catalog number: A9165)
  13. [Leu15]-Gastrin I human (Sigma-Aldrich, catalog number: G9145)
  14. Recombinant Human EGF (R&D, catalog number: 236-EG-200)
  15. Recombinant Human FGF10 (R&D, catalog number: 345-FG-25)
  16. A83-01 (Tocris, catalog number: 2939/10)
  17. Y-27632 (Tocris, catalog number: 1254/10
  18. Wnt3A conditioned medium (京创和益, catalog number: CH-M001A)
  19. R-spondin1 conditioned medium (京创和益, catalog number: CH-M002A)
  20. Noggin conditioned medium (京创和益, catalog number: CH-M003A)
  21. Alexa FluorTM 488 Phalloidin (Thermo Fisher Scientific, catalog number: A12379)
  22. Hoechst 33342 (Sigma-Aldrich, catalog number: 14533)

仪器设备

  1. 细胞培养箱 (Eppendorf, model: C170i)
  2. 离心机 (Eppendorf, model: 5810R)

软件

  1. Operetta CLS高内涵成像分析系统 (PerkinElmer, USA)
  2. Harmony分析软件 (PerkinElmer, USA)

实验步骤

Copyright: © 2022 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：李鹏飞. (2022). 高内涵成像分析系统用于类器官蛋白表达分析. Bio-101: e1010889. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010889.
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How to cite: Li, P. F. (2022). Using high-content Screening Analysis System to Analyse the Expression and Distribution of Certain Protein in Stomach Organoid. Bio-101: e1010889. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010889.
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