Screening Regulatory factors for Production of Cytoplasmic C hromatin Fragments by Immunofluorescence

材料与试剂

1. 384孔板（品牌：ViewPlate，货号：6007460）
2. 胎牛血清（品牌：NTC，货号：SFBE）
3. DMEM/HIGH GLUCOSE（品牌：Hyclone，货号：SH30022.01）
4. MEM NEAA（100×）（品牌：Gibco，货号：11140-050）
5. GlutaMAX（100×）（品牌：Gibco，货号：35050-061）
6. 0.25% Trypsin-EDTA（1×）（品牌：Gibco，货号：25200-056）
7. Penicillin-Streptomycin Solution（品牌：Hyclone，货号：SV30010）
8. Opti-MEM（1×）（品牌：Gibco，货号：31985-070）
9. H3K9me3抗体（品牌：Abcam，货号：ab8898）
10. rH2AX抗体（品牌：Santa Cruz Biotechnology，货号：sc-517348）
11. Alexa Fluor 568 goat anti- rabbit IgG（H+L）（品牌：Invitrogen，货号：A11011）
12. Alexa Fluor 488 goat anti- mouse IgG（H+L）（品牌：Invitrogen，货号：A11001）
13. DAPI（品牌：碧云天，货号：C1002）
14. Triton X-100（品牌：碧云天，货号：ST795）
15. Tween-20（品牌：碧云天，货号：ST825）
16. 10× PBS 缓冲液（品牌：BBI，货号：E607016-0500）
17. 4%组织固定液（广州晶欣生物科技有限公司，货号：JX0100）
18. 即用型正常山羊血清（品牌：博士德生物，货号：AR009）
19. Dharma FECT1 Transfection Reagent（品牌：Dharmacon，货号：T-2001-01）
20. 5×siRNA Buffer（品牌：Dharmacon; 货号：B-002000-UB-100，使用时用去离子水稀释为1×siRNA Buffer）
21. 全基因组siRNA试剂（Human ON-TARGET plus siRNA Library-Genome-SMARTpool，货号G-105005-E2-025）
22. 培养IMR90细胞的培养基（见溶液配方）
    

仪器设备

1. Multidrop Combi 自动分液器（Thermo Fisher Scientific）
2. Blue Washer洗板机
3. Operetta高内涵成像分析仪
   
   仪器如图： 
   
   
   
4. 水平离心机
   

实验步骤