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利用原位质谱法进行药物靶标蛋白配体的高通量筛选

High-throughput Screening of Ligands towards Targeted Proteins using Native Mass Spectrometry

孟 孟献斌
晏 晏顶霏
邓 邓海腾

发表时间: 2022年01月06日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010886 浏览次数: 3086

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高通量筛选实验手册
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摘要：原位质谱(native mass spectrometry)技术是于近十年发展起来的生物质谱新方法，如今已逐渐成为研究生物大分子蛋白质复合物、化学合成的金属纳米团簇、化学反应的自组装体系、以及蛋白质和其它分子相互作用的重要工具。原位质谱法通常使用接近生理pH的挥发性缓冲盐水溶液以及较温和的温度和电压，在从溶液转移到气相进行质谱分析时保留非共价相互作用和四维蛋白质结构，这使得研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-配体相互作用、亚基结构和化学计量学成为可能。原位质谱技术用于高通量药物筛选的工作原理是将已知起始浓度的蛋白与药物分子孵育后在其非变性条件下直接喷射到质谱仪中，通过游离蛋白、蛋白和药物分子复合物的质谱峰响应强度来计算出蛋白和配体分子的结合常数。

Keywords: 原位质谱 search 响应强度 search 结合常数 search

材料与试剂

  1. 2 mL进样瓶(Waters，catalog number: 186000307C)
  2. 直喷进样针(Waters，catalog number: M956231AD1-S)
  3. 微量上样针(Eppendorf，catalog number: 5242956003)
  4. 缓冲液交换小柱(BIO-RAD，catalog number: 732-6221)
  5. BCA蛋白浓度测定试剂盒(Beyotime，catalog number: P0012S)
  6. 50 mM 乙酸铵溶液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 离心机(Eppendorf, centrifuge 5810 R)
  2. 多功能酶标仪(BioTek, CytationTM 5型)
  3. 质谱仪(Waters SYNAPT G2-Si)

实验步骤

Copyright: © 2022 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：孟献斌, 晏顶霏, 邓海腾. (2022). 利用原位质谱法进行药物靶标蛋白配体的高通量筛选. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010886. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010886.
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How to cite: Meng, X. B., Yan, D. F. and Deng, H. T. (2022). High-throughput Screening of Ligands towards Targeted Proteins using Native Mass Spectrometry. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010886. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010886.
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