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线粒体质量定量分析

Quantitative Analysis of Mitochondrial Mass

张 张文馨
王 王瑛

发表时间: 2021年11月25日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010885 浏览次数: 3559

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高内涵成像及分析实验手册
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摘要：线粒体是存在于所有真核细胞中独特的膜结构细胞器，是进行氧化磷酸化，生产ATP的主要细胞供能场所，为细胞的“发电站”。线粒体的形态多样，一般呈条形或椭圆形，与细胞的营养状态有关 (Cottet-Rousselle et al., 2011)。渗透细胞的MitoTracker®探针包含一个轻度硫醇反应性的氯甲基部分，用于标记线粒体。探针可被动扩散穿过质膜并积聚在活性线粒体中，即使线粒体功能被破坏或细胞经过固定和透化处理，用这些染料染色的细胞仍保留其荧光染色模式。
本实验通过MitoTracker®探针标记神经干细胞线粒体，使用Thermo Fisher Cellomics VTI 700来进行神经干细胞的线粒体定量分析。

Keywords: 线粒体 search 神经干细胞 search MitoTracker®探针 search 高内涵定量分析 search

材料与试剂

  1. Corning® 96-well Flat Clear Bottom Black Polystyrene TC-treated Microplates, Individually Wrapped, with Lid, Sterile (Corning, catalog number: 3603)
  2. Corning® 100 mm TC-treated Culture Dish (Corning, catalog number: 430167)
  3. Poly-L-ornithine hydrobromide (PLO) (Sigma, catalog number: P3655)
  4. Laminin (Sigma, catalog number: L2020)
  5. DMEM/F-12 (BI, catalog number: 01-172-1ACS)
  6. STEMdiff™ Neural Progenitor Medium (STEMCELL, catalog number: 05833)
  7. AccutaseTM (STEMCELL, catalog number: AT-104)
  8. DPBS (BI, catalog number: 02-023-1ACS)
  9. DAPI (Sigma, catalog number: D9542)
  10. 4%PFA (BBI, catalog number: E672002)
  11. MitoTracker® Red CMXRos (Invitrogen, catalog number: M7512)
  12. MitoTracker工作液浓度 (50μM) (见溶液配方)
  13. PBST (见溶液配方)

仪器设备

  1. 细胞培养箱 (Eppendorf, model: C170i)
  2. 全自动细胞计数仪 (Countstar, model: Countstar FL)
  3. 高通量活细胞分析仪 (Thermo Fisher Cellomics, model: VTI700)

软件

  1. HCS studio细胞分析软件

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：张文馨, 王瑛. (2021). 线粒体质量定量分析. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010885. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010885.
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How to cite: Zhang, W. X. and Wang, Y. (2021). Quantitative Analysis of Mitochondrial Mass. // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010885. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010885.
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