蛋白质晶体高通量筛选制备方法

王乐乐; 范仕龙

doi:10.21769/BioProtoc.1010882

Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

蛋白质晶体高通量筛选制备方法

High Throughput Screening Method for Preparation of Protein Crystals

王王乐乐

范范仕龙

发表时间: 2021年12月10日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010882 浏览次数: 3869

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摘要：蛋白质晶体学是利用蛋白质晶体的X射线衍射数据来分析生物大分子三维精细结构的学科，其中主要的研究步骤之一是蛋白质晶体的获得，而结晶制备过程是需要大量的生长条件来进行筛选，通过全自动化、高通量的设备可为繁复的结晶筛选试验提供快速简便的技术支持。本文利用蛋白质结晶筛选工作站Mosquito，介绍如何采用坐滴法、悬滴法、Additive方法来实现蛋白质晶体的高通量筛选制备，其中的蛋白质溶液样品以溶菌酶溶液为例。

Keywords: 高通量筛选

材料与试剂

96孔晶体板 (Swissci，catalog number：3W96TUVP)
96孔悬滴池液板 (TTP Factory，catalog number：4150-05701 SPT)
96孔悬盖板 (TTP Factory，catalog number：4150-05600 viewdrop)
1.5 ml EP管 (ExCellBio，catalog number：CS015-0041)
50 ml离心管 (Corning，catalog number：430829)
针卷 (TTP Factory，catalog number：4150-03020 SPT)
蛋白条 (TTP Factory，catalog number：4150-03100 SPT)
悬滴池液板适配器 (TTP Factory，catalog number：3019-05012 SPT)
悬滴盖板适配器 (TTP Factory，catalog number：3019-05101 SPT)
溶菌酶 (Macklin，catalog number：L6051-25g)
Crystal Screen™试剂盒 (Hampton Research，catalog number：HR2-110)
Crystal Screen 2™试剂盒 (Hampton Research，catalog number：HR2-112)
Additive Screen试剂盒 (Hampton Research，catalog number：HR2-428)
超纯水 (经过超纯水仪过滤后的去离子水)
溶菌酶溶液 (见溶液配方)

仪器设备

Mosquito蛋白结晶筛选仪 (TTP Factory，型号：Mosquito)
4 °C高速离心机 (Thermo Scientific，型号：Sorvall Legend Micro 17)
体式显微镜 (Nikon，型号：SMZ18)
1 ml移液器 (Thermo Scientific，型号：Finnpipette F1)
20 µl移液器 (Thermo Scientific，型号：Finnpipette F1)
全自动液体处理工作站 (Tecan，型号：Freedom EVO)
自动封膜机 (BRANDEL，型号：RS-232)

实验步骤

引用格式：王乐乐, 范仕龙. (2021). 蛋白质晶体高通量筛选制备方法. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010882. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010882.

下载引用格式

How to cite: Wang, L.L. and Fan, S.L. (2021). High Throughput Screening Method for Preparation of Protein Crystals. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010882. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010882.

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