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高通量全自动蛋白质晶体优化池液制备方法

Automated Protein Crystal Optimisation With TTP Labtech’s Dragonfly Designer TM

燕 燕宝华
范 范仕龙

发表时间: 2021年12月10日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010880 浏览次数: 2111

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高通量筛选实验手册
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摘要：蛋白质的三维结构是理解生物大机器工作机理和药物研发的基石。作为研究蛋白质三维结构的重要手段X射线晶体学近年来也得到了不断发展，但得到高质量的蛋白晶体仍是研究大分子三维结构的瓶颈。对于绝大多数样品来说，在初筛得到蛋白晶体后仍需进行大规模结晶优化工作，其工作量较大，效率也较低。随着科技不断发展，目前已经在蛋白结晶优化方面引入得全自动配液系统，其中Dragonfly是TTP Labtech公司开发的一款全自动微升级液体处理器，它可以准确的抽吸和分配各种类型和不同粘度的液体。易于使用、直观的界面设计使晶体学家能够快速和容易的设置蛋白晶体优化条件，达到快速高效的筛选目的。同时配备有非接触性的一次性DFC枪头和DFC池液槽，也确保了样品零交叉污染。本文以一种信号通路蛋白晶体的优化方案为例，就Dragonfly在蛋白结晶优化中的一般使用方法和流程进行介绍。

Keywords: Dragonfly search 池液 search 蛋白优化 search

材料与试剂

  1. 各种型号枪头 (200 µl, 1 ml)
  2. 0.22 µm微孔滤器 (赛多利斯)
  3. 注射器 (江苏治宇医疗器械有限公司)
  4. 超纯水
  5. 50 ml离心管 (康宁)
  6. Magnesium chloride hexahydrate (SIGMA, catalog number: M2393-500G)
  7. HEPES (VETEC, catalog number: V900479-500G)
  8. Tris (VETEC, catalog number: V900483-5KG)
  9. Polyethylene glycol 3,350 (SIGMA, catalog number: 88276-1KG)
  10. DFC枪头：4150-07100 SPT
  11. DFC池液槽：4150-07103 SPT
  12. 96孔晶体板 (Swissci, catalog number: 3W96TUVP)
  13. 48孔晶体板 (SWISSCI MRC Maxi 48孔板)
  14. 1 M Hepes缓冲液 (见溶液配方)
  15. 1 M Tris缓冲液 (见溶液配方)
  16. 50% PEG3350 (见溶液配方)
  17. 1 M Mgcl2 (见溶液配方)

仪器设备

  1. TTP Labtech’s dragonfly®
  2. 震荡式混匀器 (德国海道夫，model: Titramax 101)
  3. Mosquito蛋白结晶筛选仪 (TTP Factory, model: Mosquito)
  4. 体式显微镜 (Nikon, model: SMZ18)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：燕宝华, 范仕龙. (2021). 高通量全自动蛋白质晶体优化池液制备方法. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010880. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010880.
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How to cite: Yan, B. H. and Fan, S. L. (2021). Automated Protein Crystal Optimisation With TTP Labtech’s Dragonfly Designer TM. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010880. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010880.
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