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高通量蛋白质稳定性鉴定和buffer条件筛选

High Throughput Protein Stability Identification and Buffer Screening

王 王乐乐
范 范仕龙

发表时间: 2021年12月10日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010877 浏览次数: 4721

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高通量筛选实验手册
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摘要：蛋白质在进行结晶的过程中要求蛋白质在溶液中的状态要稳定性良好，如果蛋白太容易聚集，或者太容易变性，都不利于蛋白晶体的形成，这也为蛋白结晶筛选提供了一条新的思路。本文介绍了如何通过蛋白质稳定分析仪Uncle来实现高通量蛋白质稳定性鉴定和buffer条件筛选。文中实验以溶菌酶溶液为例，Buffer条件以16种不同pH值为例，来进行实验操作和数据分析，高通量、全方面、多层次、快速地对蛋白缓冲条件进行筛选。

Keywords: 蛋白质稳定性 search 高通量测定 search buffer条件筛选 search

材料与试剂

  1. 10 µl，200 µl移液枪头 (NEST, catalog number: 301006,302106)
  2. 1000 µl移液枪头 (QSP, catalog number: 112NXL-Q)
  3. 1.5 ml EP管 (ExCellBio, catalog number: CS015-0041)
  4. 50 ml 离心管 (Corning, catalog number: 430829)
  5. 密封条 (Unchained Labs, catalog number: 201-1013)
  6. UNi管 (Unchained Labs, catalog number: 201-1010)
  7. 溶菌酶 (Macklin, catalog number: L6051-25g)
  8. Stock Options pH筛选试剂盒 (Hampton Research, catalog number: HR2-241)
  9. 超纯水 (经过超纯水仪过滤后的去离子水)
  10. Stock Options pH筛选试剂盒中16种pH值缓冲液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 蛋白质稳定性检测仪 (生产商：美国Unchained Labs，model: UNcle)
  2. 4度高速离心机 (Thermo Scientific, model: Sorvall Legend Micro 17)
  3. 移液器 (Thermo Scientific, model: Finnpipette F1)

软件

  1. UNcle Client 5.03
  2. UNcle Analysis 5.03

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王乐乐, 范仕龙. (2021). 高通量蛋白质稳定性鉴定和buffer条件筛选. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010877. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010877.
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How to cite: Wang, L. L. and Fan, S. L. (2021). High Throughput Protein Stability Identification and Buffer Screening. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010877. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010877.
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