Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

基于96孔板的点阵式菌种文库复制及维护

Replication and Maintenance of 96-well Plate-based Arrayed Bacteria Library

韩 韩帅
朱 朱慧芳
赵 赵宏伟
田 田维新
陈 陈铭

发表时间: 2021年11月12日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010872 浏览次数: 2968

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高通量筛选实验手册
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摘要：基于质粒载体的点阵式文库往往以菌种形式保存在多孔板中，每个孔的菌种携带一种特定的插入片段，例如用于基因过表达筛选的ORF/cDNA文库 (Yang et al., 2011)、用于基因敲减的shRNA文库及用于基因敲除的sgRNA文库等。点阵式文库的使用模式主要有高通量整板筛选及少量菌种单挑两种。文库的使用过程中不可避免会发生菌液的反复冻融，为保证菌种的活性及文库的完整性，我们在文库使用之前会将整个文库进行复制备份。由于全基因组质粒文库的库容量大，传统的手动菌种接种耗费人力和时间，已不能满足需求。本文介绍了利用高通量移液设备进行点阵式菌种文库复制的方法以及文库维护中需要注意的要点。

Keywords: 点阵式文库 search 菌种复制 search 文库保存 search

材料与试剂

  1. 96孔保菌板 (Nunc, catalog number: 260860) 
  2. 手封铝膜 (Thermo, catalog number: CNG6570) 
  3. iPipettePro高通量移液器配套枪头 (Apricot Designs, catalog number: 125-096-EZ-S) 
  4. Multidrop配套标准分液盒 (Thermo, catalog number: 24072671) 
  5. 甘油 (国药集团化学试剂有限公司，沪试，catalog number: 10010618)
  6. Tryptone (OXOID LTD, catalog number: LP0042) 
  7.  酵母提取物 (OXOID LTD, catalog number: LP0021) 

仪器设备

  1. 自动分液器 (Thermo, Multidrop Combi) 
  2. 高通量移液器 (Apricot Designs, iPipettePro) 
  3. 震板机 (Eppendorf, Thermomixer, comfort) 
  4. 细菌培养箱 (上海精宏实验设备有限公司，DNP-9162) 
  5. -80 °C冰箱 (Thermo, FORMA 900 Series) 

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：韩帅, 朱慧芳, 赵宏伟, 田维新, 陈铭. (2021). 基于96孔板的点阵式菌种文库复制及维护. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010872. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010872.
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How to cite: Han, S., Zhu, H. F., Zhao, H. W., Tian, W. X. and Chen, M. (2021). Replication and Maintenance of 96-well Plate-based Arrayed Bacteria Library. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010872. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010872.
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