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EU标记法测定细胞RNA合成

EU Labelling Method for RNA Synthesis Detection of Cells

鲁 鲁家骏
韩 韩帅
杨 杨巍维

发表时间: 2021年11月25日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010870 浏览次数: 3990

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高内涵成像及分析实验手册
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摘要：RNA作为细胞内最为重要的信息分子，承担了贮存，转移遗传信息，并能将储存在DNA中的遗传信息传递至蛋白质。不仅如此，一些RNA分子作为核酶在细胞内催化部分反应，部分RNA还能调控基因表达。5-乙炔尿嘧啶核苷 (5-ethynyl uridine, EU)，一种可以穿透细胞膜的尿苷类似物，进入细胞后掺入新合成的RNA，且并不掺入DNA。click chemistry反应可以将含有叠氮基的荧光染料与乙炔基团相连接，将新产生的RNA标记上荧光。通过FACS或荧光显微镜检测荧光信号，即可获得细胞内RNA的合成以及RNA含量变化信息。该EU标记RNA的实验方法能够帮助研究者们探究疾病发生机制，且其在药物毒理研究及安全性评价方面都有着普遍的应用。

Keywords: RNA synthesis search EU标记法 search click chemistry search

材料与试剂

  1. 96孔黑边底透板 (Corning, catalog number: 3904)
  2. HeLa细胞
  3. 胎牛血清 (Gemini, catalog number: 900-108 ) 
  4. Global RNA Synthesis Assay kit (Abcam, catalog number: ab273285)
    试剂盒内提供的试剂：
    Wash Buffer (10x)
    Fixative Solution
    Permeabilization Buffer (10x)
    RNA Label (100x)
    Copper Reagent (100x)
    Fluorescent Azide (100x)
    Reducing Agent (20x)
    Total DNA Stain (1000x)
    Actinomycin D (100x)
  5. DMEM培养基 (Hyclone, catalog number: SH3002201)
  6. PBS (见溶液配方)

仪器设备

  1. 高内涵细胞分析仪 (PerkinElmer, Opera，配有355 nm/488 nm/561 nm激光器)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：鲁家骏, 韩帅, 杨巍维. (2021). EU标记法测定细胞RNA合成. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010870. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010870.
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How to cite: Lu, J. J., Han, S. and Yang, W. W. (2021). EU Labelling Method for RNA Synthesis Detection of Cells. // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010870. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010870.
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