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小胶质细胞吞噬Aβ (微球颗粒) 能力评估

The Cytophagy of Aβ Microsphere Particles by Microglia

王 王瑛

发表时间: 2021年11月18日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010868 浏览次数: 3205

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高内涵成像及分析实验手册
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摘要：近年来的研究发现，阿尔茨海默病 (Alzheimer’s Disease, AD) 病人脑内弥散的老年斑周围小胶质细胞的聚集和活化是机体对于不利因素的自我防御反应。小胶质细胞是中枢神经系统内调节先天免疫和适应性免疫反应的免疫活性细胞 (Kofler and Wiley, 2011)，能对中枢神经系统损伤做出级联反应 (Gehrmann et al., 1995)，当遭遇各种损伤或免疫刺激如缺血缺氧、感染、创伤、退行性病变时，小胶质细胞迅速激活，其形态由分枝状变为阿米巴样，杆状或丛状分支 (Garden and Moller, 2006) 。
AD的神经病理学特征之一是淀粉样β (Aβ) 肽的积累，Aβ具有神经毒性，可溶性的Aβ寡聚体诱导产生神经元细胞毒性、炎症反应、氧化应激以及NO生成等。均伴有小胶质细胞的激活 (Li et al., 2011)。活化的小胶质细胞能主动聚集在沉积的β-淀粉样蛋白 (amyloid-beta peptide, Aβ) 周围发挥清除吞噬的功能。
本研究拟观察不同浓度的Aβ处理条件下BV2 (小鼠小胶质细胞系) 对Aβ吞噬作用的变化，主要通过分析进入BV2细胞质中Aβ的颗粒的个数来达到评估BV2吞噬能力的目的，为AD的治疗提供新的可行性方案并为完善AD的发病机制提供有效证据。

Keywords: 小胶质细胞 search Aβ search 吞噬 search

材料与试剂

  1. 各种规格的细胞培养板均购自美国Corning公司
  2. BV2来源于中科院生化细胞所细胞库
  3. Anti-β-Amyloid (mouse monoclonal, 6E10), 803016, BioLegend (用来标记Aβ) 
  4. Anti Iba1 (rabbit), 019-19741, WAKO (用来标记IBa1) 
  5. Donkey anti-rabbit 488, A21206, Invitrogen (对应一抗Anti-β-Amyloid) 
  6. Donkey anti-mouse 594, A21203, Invitrogen (对应一抗Anti Iba1) 
  7. Donkey Serum, 017-000-121, Jackson Lab
  8. 胎牛血清，VS500T, Ausbian购自上海天蔚钧生物科技有限公司
  9. Aβ冻干粉购自吉尔生化上海有限公司
  10. F12培养基 (无酚红) 购自美国Gibco公司
  11. DMSO, D2650, Sigma
  12. 4',6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI), E607303，上海生工生物有限公司
  13. 4%多聚甲醛固定液PFA, E672002，上海生工生物有限公司
  14. DPBS，02-023-1ACS，BI
  15. 含EDTA的胰酶，25300062，Gibco
  16. TritonX-100，A600198，BBI

仪器设备

  1. 细胞培养箱 (Eppendorf, C170i)
  2. 离心机 (Eppendorf, 5810R)
  3. 全自动细胞计数仪 (Countstar, Countstar FL)
  4. 超声破碎仪 (Covaris, S220)
  5. 高通量活细胞分析仪 (Thermo Fisher Cellomics VTI700)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王瑛. (2021). 小胶质细胞吞噬Aβ (微球颗粒) 能力评估. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010868. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010868.
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How to cite: Wang, Y. (2021). The Cytophagy of Aβ Microsphere Particles by Microglia. // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010868. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010868.
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