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体外诱导人巨噬细胞吞噬肿瘤细胞

Induction of Macrophage Phagocytosis of Tumor Cells in vitro

卢 卢晓*
叶 叶晶*
伊 伊春艳
孙 孙晓玉
赵 赵宏伟
韩 韩帅
凌 凌志洋
孙 孙兵

*Contributed equally to this work 发表时间: 2021年11月09日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010864 浏览次数: 3606

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高内涵成像及分析实验手册
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摘要：肿瘤细胞表面高表达CD47蛋白，当CD47与巨噬细胞表面的抑制性受体信号调节蛋白 (SIRPα) 结合后，会抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。研究表明，使用CD47抗体阻断CD47和 SIRPα的结合，能解除抑制，诱导巨噬细胞吞噬肿瘤细胞，从而抑制肿瘤细胞生长。在CD47抗体的刺激下，将人巨噬细胞和表达CD47的肿瘤细胞人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞 (CCRF-CEM) 共孵育，通过观察巨噬细胞的吞噬效率可评价CD47抗体在体外的功能。本实验优化了细胞处理过程，实验在巨噬细胞分化原位进行，省去了细胞转移的步骤，不仅节约了时间也避免了转移过程中对细胞造成的损害；同时采用高内涵成像技术代替流式细胞术能获得更直观的实验结果。

Keywords: 巨噬细胞 search 肿瘤细胞 search CD47抗体 search 吞噬作用 search

材料与试剂

  1. 96孔板 (Perkin Elmer, catalog number: 6005550)
  2. 50 ml离心管
  3. 人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞 (CCRF-CEM) (中国科学院细胞库)
  4. 胎牛血清 (Invitrogen-Gibco, catalog number: 10099141)
  5. FITC-anti-human CD14 (Biolegend, catalog number: 367116)
  6. anti-CD47抗体 (即Hu5F9)：实验室参考专利 (WO 2011/143624 A2) 表达
  7. 阴性对照抗体：实验室自有抗体 (不结合CD47以及其他细胞膜表面蛋白)
  8. 1640培养基 (Invitrogen-Gibco, catalog number: C11875500BT)
  9. 抗生素 (HyClone, catalog number: SV30010)
  10. Human PBMC (妙顺 (上海) 生物科技有限公司)
  11. M-CSF (义翘神州，catalog number: 11792-HNAH)
  12. Cell trace (Invitrogen-Gibco, catalog number: C34557)
  13. PBS (上海培源，catalog number: B320KJ)
  14. 1640完全培养基 (见溶液配方)
  15. Staining buffer (见溶液配方)

仪器设备

  1. 细胞培养箱 (Thermo, model: 371)
  2. 离心机 (Eppendorf, model: 5810R)
  3. 移液器 (Eppendorf)
  4. 光学显微镜 (Olympus, model: CKX41)
  5. 细胞计数仪 (Nexcelom, catalog number: Mini-005-0289)
  6. 高通量成像设备 (Perkin Elmer, model: Opera)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：卢晓, 叶晶, 伊春艳, 孙晓玉, 赵宏伟, 韩帅, 凌志洋, 孙兵. (2021). 体外诱导人巨噬细胞吞噬肿瘤细胞. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010864. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010864.
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How to cite: Lu, X., Ye, J., Yi, C. Y., Sun, X. Y., Zhao, H. W., Han, S., Ling, Z. Y. and Sun, B. (2021). Induction of Macrophage Phagocytosis of Tumor Cells in vitro. // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010864. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010864.
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