Image-based Cell Number Analysis---Data Normalization Method in Seahorse Cell Metabolic Analysis

摘要：Seahorse实时细胞能量代谢分析系统的检测数据受到孔间细胞数目、细胞活性和细胞在每个孔中均匀程度的影响，需要进行归一化处理得到有效数据后再进行分析。Seahorse细胞能量代谢分析数据归一化有以下几种常用方法：基于总蛋白定量或总DNA定量的间接评估法，以及基于细胞计数的评估法。基于成像的细胞计数方法是指利用显微成像系统对已经进行过细胞能量代谢测试过的特殊细胞板孔中细胞进行成像，然后使用合适参数对图像进行细胞数目的定量分析。相对于总蛋白定量和总DNA定量的间接评估法，活细胞显微成像计数法操作简单快速，更直接更容易实现自动化；而且在检测细胞数目的同时可区分活/死细胞，可消除实验过程中因药物处理浓度或时间不同导致的孔间细胞活性状态差异而引入的代谢数据差异；同时对细胞种植的均匀程度都也有一定的直观参考价值。本文将介绍如何利用成像仪器对Seahorse XFe24 实验板内的各孔细胞进行准确计数。