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利用高内涵筛选分析系统进行心肌细胞增殖分析

Cardiomyocytes Proliferation Assay Using High Content Screening Analysis System

刘 刘维静*
王 王玉瑶*
聂 聂宇
廉 廉虹

*Contributed equally to this work 发表时间: 2021年11月09日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010855 浏览次数: 3660

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高内涵成像及分析实验手册
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摘要: 哺乳动物出生后心脏生长的方式由心肌细胞增殖逐渐转变为心肌细胞肥大，成年心脏受损后心肌细胞增殖不足以弥补丢失的心肌细胞，所以探究心肌细胞增殖机制对于受损心肌补充新的心肌细胞至关重要。磷酸化组蛋白H3(pH3)在细胞有丝分裂过程中高表达，作为一种核分裂标志物，是检测心肌细胞增殖的常用指标。高内涵筛选分析技术是一种能够进行荧光显微成像和定量图像分析的自动化高通量筛选技术，能够将所得实验数据进行量化，更加清楚明了展现实验结果。在这里，我们使用高内涵筛选分析系统分析pH3+阳性心肌细胞数量，以评估心肌细胞增殖的程度。

Keywords: 心肌细胞增殖 search 磷酸化组蛋白H3(pH3) search 高内涵筛选分析系统 search

材料与试剂

  1. 1天、30天龄C57BL/6J小鼠（维通利华）
  2. 湿盒
  3. 组化笔 (abcam, catalog number: ab2601)
  4. 盖玻片 (世泰, catalog number: 10212450C)
  5. 粘附载玻片 (世泰, catalog number: 188105)
  6. 组织包埋盒 (世泰, catalog number: 31050102w)
  7. PBS缓冲液粉末pH7.3 (中杉金桥, catalog number: ZLI-9062)
  8. PBS缓冲液pH7.4 (gibco, catalog number: C10010500BT)
  9. 4%多聚甲醛 (LEAGENE, catalog number: DF0135)
  10. 50X EDTA抗原修复液 (LEAGENE, catalog number: YB-23522-1)
  11. DEPC水 (LEAGENE, catalog number: NR0001)
  12. Tween 20 (Biofroxx, catalog number: 1247ML500)
  13. 山羊血清封闭液 (中杉金桥, catalog number: ZLI-9056)
  14. TritoTMx-100破膜液 (Sigma-Aldrich, catalog number: X100)
  15. 抗体稀释液 (中杉金桥, catalog number: ZLI-9030)
  16. pH3抗体 (Millipore, 种属反应性: 小鼠, 人, catalog number: 06-570)
  17. α-actinin抗体 (Abcam, 种属反应性: 小鼠,大鼠,人, catalog number: ab9465)
  18. Alexa Fluor 488 羊抗兔免疫荧光抗体 (Invitrogen, catalog number: A21206)
  19. Alexa Fluor 594 羊抗鼠免疫荧光抗体 (Invitrogen, catalog number: A21203)

仪器设备

  1. 全自动组织脱水机 (Leica, catalog number: ASP300S)
  2. 包埋机 (Leica, catalog number: EG1150H)
  3. 石蜡切片机 (Leica, catalog number: RM2235)
  4. 展片机 (Leica, catalog number: HI1210)
  5. 烤片机 (Leica, catalog number: HI1220)
  6. 全自动染色机、封片机 (Thermo Fisher Scientific, catalog number: ClearVue+Gemini)
  7. 超纯水设备 (Thermo Fisher Scientific, catalog number: 50136146)
  8. 电磁搅拌器 (IKA, catalog number: MS100)
  9. 脱色摇床 (海门麒麟医用仪器厂, catalog number: TS-2)
  10. 涡旋振荡器 (Scientific Industries, catalog number: SI-0256)
  11. 台式高速冷冻离心机 (Eppendorf, catalog number: 5804R) 
  12. 移液器 (Eppendorf)
  13. 普通4 °C冰箱
  14. 共聚焦显微镜 (Zeiss, catalog number: LSM 800)
  15. 高内涵筛选分析系统 (Molecular Devices, catalog number: ImageXpress Micro)

软件

  1. ZEN
  2. MetaXpress

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：刘维静, 王玉瑶, 聂宇, 廉虹. (2021). 利用高内涵筛选分析系统进行心肌细胞增殖分析. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010855. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010855.
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How to cite: Li, W. J., Wang Y. Y., Nie, Y. and Lian, H. (2021). Cardiomyocytes Proliferation Assay Using High Content Screening Analysis System . // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010855. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010855.
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