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新生大鼠原代心肌细胞肥大模型的高内涵筛选应用

High-content Screening in Neonatal Rat Ventricular Myocytes (NRVMs) Hypertrophy Model

郭 郭瑞
王 王毅

发表时间: 2021年09月05日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010853 浏览次数: 3669

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高内涵成像及分析实验手册
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摘要：心力衰竭作为心脏疾病发展的终末阶段，是心血管疾病最主要死因之一，对人类健康的威胁不亚于于恶性肿瘤 (Guang et al., 2019)。而心肌肥大启动心力衰竭的病理过程，是心力衰竭的重要促进因素。其中，心肌细胞面积增大是心肌肥大最重要的病理变化之一 (Nakamura and Sadoshima, 2018)。新生大鼠心肌细胞由于其相对易得，与人心肌细胞有相似的生理特点，是目前用于研究心肌细胞肥大重要细胞模型之一，也是进行病理性心肌肥大和心力衰竭研究的理想起点 (Glembotski, 2013)。去氧肾上腺素 (Phenylephrine, PE) 是人工合成的拟肾上腺素类药物，与高血压、心肌肥大、心力衰竭的发生密切相关，能够直接作用于心肌细胞诱导肥大的发生 (Prasad et al., 2007)。
本研究拟采用去氧肾上腺素诱导建立稳定的新生大鼠心肌细胞肥大模型，采用双重荧光分别标记细胞骨架和细胞核，主要通过分析心肌细胞面积变化来考察药物对心肌肥大的作用，为心肌肥大及心衰的治疗提供新的治疗思路并探究新的作用机制。

Keywords: 高内涵筛选 search 心肌肥大 search 荧光成像 search


材料与试剂

一、实验动物
新生SD (Sprague Dawley, SD) 大鼠，出生0-3天，购于浙江省医学科学院。

二、实验材料

  1. 高糖DMEM培养基 (Corning，美国，catalog number: 10-013-CV)
  2. 胎牛血清 (FBS) (Corning，美国，catalog number: 35-081-CV)
  3. PBS (江苏凯基生物技术股份有限公司，catalog number: KGB5001)
  4. 双抗青链霉素（sp） (Corning，美国，catalog number: 25-053-CI)
  5. 去氧肾上腺素 (PE) (上海阿拉丁生化科技股份有限公司，catalog number: P106007-10g)
  6. 新生鼠心脏组织解离试剂盒 (Miltenyi，德国，catalog number: 130-098-373)
  7. 红细胞裂解液(Miltenyi，德国，catalog number: 130-094-183)
  8. 70 μm细胞筛网 (浙江硕华生命科学研究股份有限公司，catalog number: 251200)
  9. 0.22 μm真空滤网 (Millipore，美国，catalog number: SLGPR33RB)
  10. 96孔黑板 (Corning，美国，catalog number: #3904)
  11. BRDU (5-溴-2′-脱氧尿苷,溴脲嘧啶苷) (上海阿拉丁生化科技股份有限公司，catalog number: B5002)
  12. Alexa Four 488 Phalloidin (Cell Signaling Technology，美国，catalog number: 8878S)
  13. Hoechst 33342 (Cell Signaling Technology，美国，catalog number: #4082)
  14. 4%多聚甲醛 (生工生物工程(上海)股份有限公司，catalog number: E672002-0500)
  15. cTnT兔抗 (proteintech，catalog number: 15513-1-AP)
  16. 免疫染色一抗稀释液 (碧云天，catalog number: P0103)
  17. TRITC山羊抗兔 (proteintech，catalog number: SA00007-2)


仪器设备

  1. 恒温振荡器 (Eppendorf，美国，model: ThermoMixer C)
  2. 高速冷冻离心机 (Eppendorf，德国，model: Centrifuge 5810R)
  3. Pico个人型高内涵成像分析系统 (Molecular Devices，美国，model: ImageXpress®)
  4. 超净台 (Thermo，美国，model: 1300SERIES A2)
  5. CO2细胞培养箱 (Thermo，美国，model: Forma311)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：郭瑞, 王毅. (2021). 新生大鼠原代心肌细胞肥大模型的高内涵筛选应用. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010853. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010853.
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How to cite: Guo, R. and Wang, Y (2021). High-content Screening in Neonatal Rat Ventricular Myocytes (NRVMs) Hypertrophy Model. // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010853. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010853.
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