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细胞周期调控因子筛选---FUCCI活细胞标记法

Screening for Cell Cycle Regulators-FUCCI Live Cells Labeling Method

鲁 鲁家骏
韩 韩帅
杨 杨巍维

发表时间: 2021年09月05日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010852 浏览次数: 4326

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高通量筛选实验手册
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摘要：细胞周期是细胞生命活动的基本过程，细胞周期的精准运行是真核生物的生存、发育和繁殖的基础。荧光泛素化细胞周期指示物 (Fluorescent Ubiquitination-based Cell Cycle Indicator，简称FUCCI) 是将两个细胞周期调节因子Cdt1和Geminin分别与红色荧光蛋白以及绿色荧光蛋白相融合，Cdt1和Geminin会随细胞周期的运行含量不断变化，可以通过检测细胞内两种荧光信号来判定细胞所处的细胞周期阶段。目前哺乳动物细胞周期的分子调控机制研究尚不充分，为此我们将FUCCI技术 (Sakaue, 2008) 和siRNA文库相结合，建立了高通量筛选细胞周期调控因子的方法。

Keywords: 细胞周期 search FUCCI search 高通量筛选 search

材料与试剂

  1. 6 cm dish (NEST, catalog number: 700501)
  2. 96孔板 (Nunc, catalog number: 167008)
  3. 384孔黑边底透板 (Corning, catalog number: 3764)
  4. 胰酶 (GEBICO, catalog number: 25200072)
  5. 胎牛血清 (Gemini, catalog number: 900-108)
  6. DMEM培养基 (Hyclone, catalog number: SH3002201)
  7. DMSO (MP，catalog number: 0219605580)
  8. Hoechst33342 (Invitrogen, catalog number: 1985413)
  9. 16%多聚甲醛 (Alfa Aesar, catalog number: #43368)
  10. siCDK1 序列：ACUUCGUCAUCCAAAUAUA (Genepharma)
  11. RISC-free siRNA (Dharmacon, catalog number: #D-001220-01-05)
  12. ON-TARGETplus Non-targeting Pool siRNA序列：
    UGGUUUACAUGUCGACUAA, UGGUUUACAUGUUGUGUGA, UGGUUUACAUGUUUUCUGA, UGGUUUACAUGUUUUCCUA
  13. DharmaFECT1 (Dharmacon, catalog number: T-2001-03)
  14. 5x siRNA buffer (Dharmacon, catalog number: B-002000-UB)
  15. RNase-free Water (Qiagen, catalog number: 129117)

仪器设备

  1. 流式分选仪 (BD, Aria II)
  2. 流式检测仪 (BD, LSR II)
  3. 自动化分液仪 (Thermo Fisher, Multidrop Combi)
  4. 洗板机 (BioTek, ELx405 Select Deep Well Microplate Washer)
  5. 高内涵细胞分析仪 (PerkinElmer, Operetta)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：鲁家骏, 韩帅, 杨巍维. (2021). 细胞周期调控因子筛选---FUCCI活细胞标记法. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010852. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010852.
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How to cite: Lu, J. J., Han, S. and Yang, W. W. (2021). Screening for Cell Cycle Regulators-FUCCI Live Cells Labeling Method. // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010852. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010852.
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