Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

利用Biacore8K+高通量筛选靶向生物大分子的小分子活性物质

High-Throughput Screening of Small-molecular Targeting Biomolecular by Biacore8K+

常卿* 常卿*
杨 杨姊*
李 李文奇

*Contributed equally to this work 发表时间: 2021年08月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010846 浏览次数: 5447

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高通量筛选实验手册
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摘要：目前创新药物开发的源头是发现具有生物活性的先导化合物，对各种化合物库的高通量筛选是最重要的组成部分。Biacore8K+是基于表面等离子共振 (Surface plasmon resonance，SPR) 技术的高通量分子水平的相互作用分析系统。具有高通量，无标记，自动化，高灵敏度等特点。通过将表达纯化的目标蛋白分子通过氨基偶联的方法固定在生物传感芯片上，将待测的分析物以一定浓度流过芯片表面，若二者之间有相互作用，则芯片表面的折射率发生变化从而导致共振角的改变。通过实时检测共振角的变化，可全面提供分子间相互作用的动力学和亲和力信息。

Keywords: 表面等离子共振 search 高通量筛选 search Biacore 8K+ search

材料与试剂

  1. LB培养基 (BD, catalog number: 214906)
  2. 咪唑 (北京拜尔迪生物技术有限公司, catalog number: DE0279)
  3. NaCl (北京拜尔迪生物技术有限公司, catalog number: DE0008)
  4. Tris (北京拜尔迪生物技术有限公司, catalog number: DE0006)
  5. PTG (异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) (生工生物工程 (上海) 股份有限公司，catalog number: A100487)
  6. 重组表达人冠状病毒蛋白NSP5的大肠杆菌 (来自北京协和医院张抒扬课题组)
  7. Superdex200 increase 10/300 GL (Cytiva, catalog number: 28990944)
  8. 预染蛋白Marker (Thermo Scientific, PageRuler, catalog number: 26616)
  9. 氨苄青霉素Amp (北京拜尔迪生物技术有限公司，catalog number: DE0086)
  10. 镍亲和柱 (Cytiva, Ni Sepharose 6 FF, catalog number: 11000887)
  11. 浓缩管 (Merck, catalog number: UFC8010)
  12. S系列CM5芯片( Cytiva, Series S Sensor Chip CM5, catalog number: 29149603)
  13. 无盖EP管 (Cytiva, catalog number: BR100287)
  14. 96孔板 (Cytiva, catalog number: BR100503)
  15. 封口膜 (Cytiva, catalog number: 28975816)
  16. 醋酸钠缓冲液 (Cytiva, Acetate 4.0, catalog number: BR100349; Acetate 4.5, catalog number: BR100350; Acetate 5.0, catalog number: BR100351；Acetate 5.5, catalog number: BR100352)
  17. 氨基偶联试剂盒 (Cytiva, catalog number: BR100050)
  18. DMSO (Sigma-Aldrich, catalog number: 34943)
  19. 10x PBS-P (Cytiva, catalog number: 28995084)
  20. 抗COVID-19中药单体库 (TargetMoI, catalog number: L6720)
  21. LB液体培养基 (见溶液配方)
  22. TBS缓冲液 (见溶液配方)
  23. 1 M咪唑 (见溶液配方)
  24. Buffer1 (见溶液配方)
  25. Buffer2 (见溶液配方)
  26. Buffer3 (见溶液配方)
  27. Buffer4 (见溶液配方)
  28. 1.05x PBS-P (见溶液配方)
  29. 含有不同浓度DMSO溶液(见溶液配方)

仪器设备

  1. 实验室水纯化系统 (PALL, model: S41142CE)
  2. 胶片观察灯 (北京六一生物科技有限公司，model:WD9405)
  3. 摇床 (Thermo Scientific, model:SHKE8000)
  4. 紫外可见分光光度计 (Biochrom WPA, model:Biowave II, catalog number: 80300375)
  5. 制冰机 (雪科电器有限公司，model: CK2021010042)
  6. 大容量离心机 (Beckman Coulter, model:Avanti J6-MI)
  7. 高速冷冻离心机 (Beckman Coulter, model:Avanti J-26S XP)
  8. 超声破碎仪 (Sonica, model:q700)
  9. AKTA蛋白纯化系统 (GE Healthcare, model:Pure10)
  10. 蛋白电泳仪 (Bio-Rad, model: L00657)
  11. 蛋白胶染脱色仪 (金斯瑞生物科技有限公司，model: L00760C)
  12. 蛋白定量仪 (Unchained Labs, model: Little Lunatic)
  13. Biacore8K+相互作用分析系统 (Cytiva, Biacore8K+system，model: 29283382)
  14. 离心机 (Eppendorf, model: 2231000771)
  15. 真空脱气装置 (Millipore, model: WP6122050)

软件

  1. 系统控制软件：BiacoreTM8K Control Software
  2. 数据分析软件：Biacore Insight Evaluation

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：常卿, 杨姊, 李文奇. (2021). 利用Biacore8K+高通量筛选靶向生物大分子的小分子活性物质. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010846. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010846.
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How to cite: Chang, Q., Yang, Z., and Li, W. Q. (2021). High-Throughput Screening of Small-molecular Targeting Biomolecular by Biacore8K+. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010846. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010846.
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