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无菌条件下贴壁细胞换液的Bravo自动化液体处理平台参数设置

Parameter Setting of Bravo Automated Liquid Handling Platform for Adherent Cells Medium Exchange Under Sterile Condition

慈 慈云青

发表时间: 2021年08月06日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010845 浏览次数: 1837

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高通量筛选实验手册
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摘要：在一些高通量筛选实验中，细胞培养一定时间后，培养液营养成分和代谢产物逐渐变化，导致低PH环境，进而对细胞生长产生影响。另外，在诱导分化或其他特定表型出现的筛选体系中，也往往涉及更换不同成分培养液的操作。所以，实验者需要在无菌条件下对微孔板内细胞更换培养液，以维持细胞继续增长。传统方法需要通过排枪吸液和加液，耗时长，且易将贴壁不牢的细胞吸起，导致实验失败，合适的高通量仪器可以帮助实验者实现贴壁细胞换液操作。本文采用293-T细胞，细胞培养于384孔板，通过Bravo自动化液体处理平台，可以实现无菌条件下细胞换液，细胞贴壁不脱落，且不影响细胞状态，以期后续实验的顺利进行，为优化筛选体系中的换液操作提供参考流程。

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材料与试剂

  1. DMEM培液 (HyClone, Catalog Number: SH 3024301)
  2. TRYPSIN-EDTA (0.25%) (Gibco, Catalog Number: 25200056)
  3. 384孔黑边底透板 (Corning, Catalog Number: 3764)
  4. 96孔PP材质板 (Corning, Catalog Number: 3879)
  5. 15 ml离心管 (NEST, Catalog Number: 601002)
  6. 50 ml离心管 (NEST, Catalog Number: 602002)
  7. Multidrop仪器标准管分液盒 (Thermo, Catalog Number: 24072671(0))
  8. 细胞计数片 (BodBoge细胞计数仪配置)
  9. 移液管 (Corning, Catalog Number: 4488)
  10. 100 mm细胞培养皿 (NEST, Catalog Number: 704001)
  11. 70 µl384孔Bravo仪器移液头盒 (Fluotics, Catalog Number: AGI-P70.ST)

仪器设备

  1. BodBoge细胞计数仪 (上海祥合医疗器械有限公司，型号: JSY-SC-021H)
  2. Multidrop Combi自动分液器 (Thermo Fisher Scientific，型号: Multidrop Combi)
  3. Bravo自动化液体处理平台 (Agilent Technologies，型号: Bravo)
  4. 高速离心机 (Eppendorf，型号: Centrifuge 5810R)
  5. Ensight多功能微孔板检测仪 (PerkinElmer，型号: Ensight Multimode Plate Reader)
  6. 37 °C恒温培养箱 (Thermo Fisher Scientific，型号: SERIES 8000 DH)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：慈云青. (2021). 无菌条件下贴壁细胞换液的Bravo自动化液体处理平台参数设置. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010845. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010845.
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How to cite: Ci, Y. Q. (2021). Parameter Setting of Bravo Automated Liquid Handling Platform for Adherent Cells Medium Exchange Under Sterile Condition. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010845. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010845.
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