研究背景

细胞的异常增殖是造成肿瘤发生的原因之一。在研究肿瘤发生发展的过程中，能准确反映细胞增殖的检测方法显得尤为重要。在该方法中，我们检测了结直肠癌细胞系HT29细胞的增殖能力。EdU染色可标记处于细胞周期S期的细胞，结合高内涵细胞成像分析仪计算出EdU阳性细胞占总细胞的比例。我们可通过比较处于S期的细胞比例判断细胞的增殖能力。该方法适用于检测多因素影响细胞增殖、细胞数量较少的实验案例。该实验方法的优势在于能一次性得到高通量的结果。

材料与试剂

1. 96孔细胞培养板（Corning, catalog number: 3599）
2. 离心管（Corning, catalog number: 430791）
3. HT29细胞
4. RPMI-1640培养基（Gibco, catalog number: 11875093）
5. 胎牛血清 FBS（Excell Bio, catalog number: FSP500）
6. 双抗（Gibco, catalog number: 15140122）
7. DPBS（Gibco, catalog number: C14190500CP）
8. 含EDTA的胰酶（Invitrogen, catalog number: 25200114）
9. BeyoClick^TM EdU-555 细胞增殖检测试剂盒（Beyotime, C0075S）
10. 1×PBS（见溶液配方）
    
11. 4%多聚甲醛（见溶液配方）
12. 3% BSA（见溶液配方）
13. 0.3% TritonX-100（见溶液配方）
    

仪器设备

1. 细胞培养箱（Heraeus, model: HERAcell 150）
2. 离心机（Eppendorf, model: 5810R）
3. 移液器（Eppendorf）
4. 全自动细胞计数仪（Bodboge, JSY-SC-021H）
5. 高内涵细胞成像分析仪（Perkin Elmer, Operetta）
   

软件

1. Harmony 4.8

实验步骤