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通过高内涵成像分析系统对小鼠早期胚胎中蛋白质的定位及定量分析

The Locating and Quantitative Analysis of Proteins in Mouse Oocytes and Early Embryos via High Content Imaging Analysis System

谈 谈家骏
李 李颖峰

发表时间: 2021年07月26日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010837 浏览次数: 1857

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高内涵成像及分析实验手册
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摘要：早期胚胎发育是一个重要早期生命活动过程。在这一过程中发生了雌雄配子融合，合子基因组激活等重要事件。许多蛋白的表达、定位的变化对于早期胚胎发育的正常进行至关重要。同时对于这一时期特定蛋白的表达及定位的研究也帮助人们更好地理解这一过程的调控机制。受限于这一时期生物材料的有限性和可操作性，常规的基于Confocal的蛋白质水平及定位研究耗时耗力，可统计的样本数较少，统计分析繁琐且重复性差。本方法通过高内涵成像系统的PreciScan模式，可一次性收集上百乃至更多的早期胚胎样品的三维成像数据，并进行批量计算分析，方便快捷地获取具有统计学意义的成像数据，助力早期胚胎中的蛋白质功能研究。

Keywords: 三维成像计算 search 蛋白质定位 search 蛋白质定量 search 早期胚胎 search

试剂与材料

  1. Glycine (Sigma, catalog number: G8898)
  2. 口吸管 (Sigma, catalog number: A5177)
  3. 3.5 cm Petri Dishes (Corning, catalog number: 351008)
  4. 96 Well Round (U) Bottom Plate, TC Surface (Thermo Scientific, catalog number: 163320)
  5. CellCarrier-96 Ultra Microplates (PerkinElmer, catalog number: 6055302)
  6. 2-6月龄雄鼠
  7. 6~8周龄雌鼠
  8. MEM Alpha (Gibco, catalog number: 32571-036)
  9. Sodium Pyruvate (100 mM) (Gibco, catalog number: 11360-070)
  10. EDTA (Amresco, catalog number: 0322)
  11. BSA (Lablead, catalog number: 0332)
  12. NaCl (Sigma, catalog number: S5886)
  13. KCl (Sigma, catalog number: P5405)
  14. Na2HPO4 (Sigma, catalog number: S5136)
  15. KH2PO4 (Sigma, catalog number: P5655)
  16. MgSO4·7H2O (Sigma, catalog number: M1880)
  17. Na lactate 60% syrup (ml/liter) (Sigma, catalog number: L1375)
  18. NaHCO3 (Sigma, catalog number: S5761)
  19. CaCl2·2H2O (Sigma, catalog number: C7902)
  20. Penicillin-Streptomycin Solution 100x (BBI, catalog number: H225FA0001)
  21. 非必需氨基酸, NEAA 100× (Gibco, catalog number: 11140050)
  22. 必需氨基酸，EAA 50× (Gibco, catalog number: 11130051)
  23. Mineral Oil (Sigma, catalog number: M8410)
  24. Poly (vinyl alcohol), PVP (Sigma, catalog number: P8136)
  25. DAPI (Beyotime, catalog number: C1002)
  26. Anti-Dnmt1 Rabbit polyclonal antibody (以mDnmt1 (700-1076aa) 肽段为抗原制备)
  27. Alexa Fluor 488标记山羊抗兔IgG (H + L) (Beyotime, catalog number: A0423)
  28. Modified MEM (MMEM) (见溶液配方)
  29. KSOM (见溶液配方)
  30. KSOM-AA (见溶液配方)
  31. 4%多聚甲醛固定液 (见溶液配方)
  32. 10× DPBS (见溶液配方)

仪器设备

  1. 二氧化碳细胞培养箱
  2. 体式显微镜 (Olympus, model: SZ61)
  3. 高内涵成像分析筛选系统 (PerkinElmer, model: Opera Phenix)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：谈家骏, 李颖峰. (2021). 通过高内涵成像分析系统对小鼠早期胚胎中蛋白质的定位及定量分析. // 高内涵成像及分析实验手册. Bio-101: e1010837. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010837.
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How to cite: Tan, J. J. and Li, Y. F. (2021). The Locating and Quantitative Analysis of Proteins in Mouse Oocytes and Early Embryos via High Content Imaging Analysis System. // High-Content Imaging and Analysis Protocol eBook. Bio-101: e1010837. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010837.
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