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酶联免疫吸附实验在β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制剂高通量筛选中的应用

Application of An Enzyme-linked Immunosorbent Assay for the Screening of Small-molecule Inhibitors Targeting β-catenin/TCF4 Interaction

付 付正豪
戚 戚海燕
闫 闫干干
刘 刘晓平
陈 陈云雨

发表时间: 2021年07月07日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010833 浏览次数: 1795

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高通量筛选实验手册
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摘要：在经典Wnt信号通路中，β-catenin/TCF4 (T-cell factor 4) 相互作用在肿瘤生长分化、化疗耐药、转移复发等过程中发挥着重要的促进作用，已成为新型靶向性抗肿瘤药物开发的理想靶标之一。为了高效地筛选抑制β-catenin/TCF4相互作用的苗头化合物，文中基于酶联免疫吸附实验 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 原理，通过优化GST-TCF4 βBD (β-catenin binding domain) 包被浓度和β-catenin反应浓度，建立ELISA高通量筛选模型并成功应用于苗头化合物的筛选。应用本筛选模型进行高通量筛选，成功筛选到白花丹素具有良好的抑制活性。本文成功地建立了适用于药物高通量筛选的ELISA筛选模型，为靶向β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制剂的高效筛选奠定了基础。

Keywords: Wnt抑制剂 search 酶联免疫吸附实验 search β-catenin/TCF4相互作用 search 白花丹素 search

材料与试剂

  1. 96孔酶标板 (Corning, Catalog number: 42592)
  2. 牛血清白蛋白 (Bovine serum albumin, BSA) (Biosharp，Catalog number: 4240GR100)
  3. 小鼠抗His标签单克隆抗体 (中杉金桥，Catalog number: TA-02)
  4. 小鼠抗GST标签单克隆抗体 (中杉金桥，Catalog number: TA-03)
  5. 辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的羊抗小鼠IgG (Biosharp, Catalog number: BL001A)
  6. 可溶型单组分四甲基联苯胺 (Tetramethylbenzidine, TMB) 溶液 (TIANGEN, Catalog number: PA107)
  7. H2SO4 (国药试剂, Catalog number: 10021608)
  8. Tween 20 (Sigma，Catalog number: V900548)
  9. DMSO (Sigma，Catalog number: V900090)
  10. 血根碱 (TargetMol公司，Catalog number: 2781)
  11. 白花丹素 (TargetMol公司，Catalog number: 2841)
  12. GST-TCF4 βBD (1～53 aa) 与β-catenin (138～781 aa) 由本室制备和保存
  13. 天然产物化合物库 (TargetMol公司)
  14. ELISA包被液 (见溶液配方)
  15. ELISA终止液 (2 mol/L H2SO4) (见溶液配方)
  16. PBS (见溶液配方)
  17. PBST (见溶液配方)

仪器设备

  1. 多功能酶标仪 (BioTek, CytationTM 5型)
  2. 移液器 (Eppendorf)

软件

  1. GraphPad Prism 5.0

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：付正豪, 戚海燕, 闫干干, 刘晓平, 陈云雨. (2021). 酶联免疫吸附实验在β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制剂高通量筛选中的应用. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010833. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010833.
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How to cite: Fu, Z. H., Qi, H. Y., Yan, G. G., Liu, X. P. and Chen, Y. Y. (2021). Application of An Enzyme-linked Immunosorbent Assay for the Screening of Small-molecule Inhibitors Targeting β-catenin/TCF4 Interaction. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010833. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010833.
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