摘要:胆固醇,又称胆甾醇,是动物组织细胞不可缺少的重要物质(Luo
et al., 2020)。胆固醇是生物膜的主要成分,在细胞器之间快速运输且分布不均。细胞内胆固醇分布异常是许多溶酶体脂质储存障碍的标志,因此细胞胆固醇可视化和成像,包括质膜和细胞内部,对于研究胆固醇的含量和分布至关重要(Wilhelm
et al., 2019)。菲律宾菌素(filipin,filimarisin)是从菲律宾链霉菌(Streptomyces filipinensis)培养物中分离得到的混合物的统称,其主要成分是FilipinIII,是一种28元环戊烯大环内酯类抗生素,可以特异的与游离的胆固醇相互作用而不与酯化的胆固醇结合。FilipinIII结合游离的胆固醇后,激发光谱波峰约在360 nm处,发射光谱波峰约在480nm处,通过检测激发波长360 nm和发射波长480 nm附近的荧光信号来表征细胞内的胆固醇含量,已被广泛应用于细胞中胆固醇的定位和定量(Maxfield and Wustner, 2012)。在进行高通量细胞内游离胆固醇的定量时,采用HCS NuclearMask
TM Red核染料,它是一种可以应用于活细胞和固定细胞标记细胞核的探针,并且可以避免甲醛固定或者表面活性剂通透时带来的影响,在实验中可以做为内参表征细胞数。本实验中,细胞在经过不同的处理之后,对细胞进行FilipinIII和HCS NuclearMask
TM Red染色,通过基于图像的高内涵筛选(high content screening, HCS)分析评价影响细胞内游离胆固醇含量和分布的处理条件。