Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

利用JANUS自动化液体工作站制备96孔板格式定制文库

Preparation of Customized Library in 96-well Plate by JANUS Automatic Liquid Workstation

杨 杨卓
韩 韩帅
陈 陈铭

发表时间: 2021年06月24日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010826 浏览次数: 2453

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高通量筛选实验手册
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摘要：在大规模初筛结束后，需要将阳性孔的试剂挑选出来组成一个新的亚库，进行第二轮的复筛验证，这个过程涉及定制文库的制备。另外，当初筛的对象不是整个文库，而是散在分布在整库中的一系列孔时，也需要制备定制亚文库用于筛选。本文将以ORF过表达质粒亚文库的定制流程为例，介绍如何从全基因组ORF过表达文库中挑选出感兴趣的质粒，制备成各孔浓度一致、可直接用于整板细胞转染实验的质粒亚文库。此流程同样适用于化合物库、siRNA文库及sgRNA文库等点阵式文库的亚文库定制，具体移液参数可依据不同加样体积及液体性质略作改动。

Keywords: 定制文库 search 单挑 search ORF search

材料与试剂

  1. 96孔U底板 (Costar, catalog number: 3879)
  2. 50 μl透明吸头 (Perkin Elmer, catalog number: 6001263)
  3. 可撕铝膜 (安捷伦PlateLoc，catalog number: 24210-001)
  4. 全基因组ORF文库 (CCSB-Broad Lentiviral Expression Library，Horizon，-80 °C保存)
  5. OptiMEM (Gibco，catalog number: 31985070)

仪器设备

  1. 离心机 (Eppendorf, catalog number: centrifuge 5810R)
  2. Multidrop自动分液器 (Thermo, catalog number: Multidrop Combi)
  3. Handler workstation自动工作站系统* (Perkin Elmer, catalog number: HANDLER WORKSTATION SX 15)
    a. UV灯
    b. HEPA
    c. Janus液体工作站 (8通道独立吸头)
    d. WinPREP®控制软件 (版本号：4.10.0.54)
    注：仅列出系统在本实验中用到的部分仪器设备
  4. 封膜机 (安捷伦PlateLoc)

实验步骤

Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：杨卓, 韩帅, 陈铭. (2021). 利用JANUS自动化液体工作站制备96孔板格式定制文库. // 高通量筛选实验手册. Bio-101: e1010826. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010826.
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How to cite: Yang, Z., Han, S. and Chen, M. (2021). Preparation of Customized Library in 96-well Plate by JANUS Automatic Liquid Workstation. // High-throughput Screening Protocol eBook. Bio-101: e1010826. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010826.
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