利用 Biacore S200 系统和 CM5 芯片检测小分子与蛋白结合的动力学和亲和力数据。本实验使用的小分子分子量为400,蛋白分子量为 20 kD。
关键词: 蛋白质,小分子,相互作用,SPR,Biacore
材料与试剂
- 无盖1.5 ml EP管(Cytiva,货号:BR-1002-87)
- 橡胶瓶盖2型(Cytiva,货号:BR-1004-11)
- 96孔板(Cytiva,货号:BR-1005-03)
- 96孔板封口膜(Cytiva,货号:28-9758-16)
- S系列CM5芯片(Cytiva,货号:29-1049-88(一片装),BR-1005-30(三片装),29-1496-03(十片装))
- 氨基偶联试剂盒(Cytiva, 货号:BR-1000-50)
- 缓冲液:10x PBS-P+ (Cytiva,货号:28-9950-84)
- 分析纯 DMSO,去离子水(0.22 μm膜过滤)。
- 蛋白:浓度一般需大于 200 μg/ml。客户需确定蛋白活性,确保不含 Tris 等带有伯氨基团的成分。如需脱盐, 可选择PD MiniTrapTM G-25(Cytiva,货号:28-9180-07)或 PD-10 Desalting(Cytiva,货号:17-0851-01)。
- 小分子:母液浓度建议大于10 mM,体积在50 μL以上,纯度>90%,溶在100%DMSO里。如含有咪唑、蔗糖、甘油等高折光率物质,需进行脱盐处理。
仪器设备
- Biacore S200生物分子相互作用系统 (Cytiva,货号:29136649)
实验步骤
Copyright: © 2020 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
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