KAPA建库试剂盒在通用方法学中的应用 下一代测序技术(NGS),又称为大规模平行测序技术,通常指第二代和第三代测序技术,与一代测序技术相比,其在测序速度以及成本上的优势使得该技术在各个领域得以迅速应用。
按所测序核酸分子的类型不同,NGS文库类型可分为DNA 文库—全基因组测序 (WGS)、全外显子组测序 (WES),染色质免疫沉淀测序 (ChIP-seq);RNA文库—全转录组测序, RNA免疫沉淀测序 (RIP-seq)。KAPA NGS系列产品可覆盖所有类型文库构建应用。
二代测序技术被应用于各种起始样本中,而流式细胞分选和激光捕获显微切割技术的出现让在单细胞水平上研究细胞基因组及转录组异质性成为可能;目前该技术的发展逐渐成熟,已被广泛用于生命科学研究的各个领域。本文介绍了流式分选小鼠E7.5胚胎外胚层细胞后使用KAPA DNA HyperPlus构建全基因组文库,以分析各个胚层的甲基化、羟甲基化的水平。
研究背景
以往的研究对小鼠原肠胚期即E7.5时期,各个胚层的甲基化、羟甲基化水平并不明确,本实验的目标是在基因组水平上进行验证。同时利用全基因组测序与TAB-seq数据相对比,找出甲基化、羟甲基化主要在基因组、基因功能区域的变化及其可能作用。
生物材料:小鼠E7.5胚胎
起始总DNA量:~120 ng基因组DNA
实验目的
构建小鼠E7.5外胚层基因组文库,用于后期5hmC相关分析。
关键词:DNA,二代测序,纯化,单细胞
实验步骤