实验名称：新型甲基化方法与传统亚硫酸氢盐甲基化方法的测序比较
产品名称：KAPA HyperPrep kit建库试剂盒

[KAPA建库试剂盒在通用方法学中的应用] 下一代测序技术(NGS)，又称为大规模平行测序技术，与一代测序技术相比，其在测序速度以及成本上的优势使得该技术在各个领域得以迅速应用。
        按所测序核酸分子的类型不同，NGS文库类型可分为DNA 文库—全基因组测序 (WGS)、全外显子组测序 (WES), 染色质免疫沉淀测序 (ChIP-seq) ; RNA 文库—全转录组测序, RNA免疫沉淀测序(RIP-seq)。KAPA NGS系列产品可覆盖所有类型文库构建应用。
        Roche KAPA文库制备试剂为通过NGS进行肿瘤研究提供了整套解决方案 (Roche Dialog，罗氏诊断在华推广KAPA NGS新一代测序系列产品完善基因检测解决方案)。KAPA人类基因组DNA定量及QC试剂盒可以在单次检测中同时评估样本量及样本质量，严防谨守助力深度测序；Roche DNA文库构建试剂盒 (KAPA HyperPrep Kit, KAPA HyperPlus Kit) 及RNA文库构建试剂盒 (KAPA RNA HyperPrep Kit) 等试剂盒具有操作极简 (一管到底)，建库快速 (单日内可完成)，文库质量和得率双高等优点；文库定量试剂盒 KAPA Library Quant Kit质量同监，为测序把好最后一道关；而mRNA-capture Kit、RNA-Seq with RiboErase和纯化磁珠对目标核酸分子的富集可有效降低测序成本。这些试剂盒可有效帮助用户获得稳定可靠的测序结果，为后期的科学实验验证及临床研究提供可信的数据依据。 (测序中国, 案例解析： 定向进化的KAPA酶，从困难样本获得高质量NGS数据的“灵魂”)

研究背景

DNA胞嘧啶修饰在很多生物学过程中 (基因表达到发育) 具有重要作用。在以往的研究中, 亚硫酸氢盐测序 (WGBS)是检测DNA修饰如5-甲基胞嘧啶 (5mC) 和5-羟甲基胞嘧啶 (5hmC) 的黄金标准，但是这种强化学处理会导致DNA的降解，从而导致测序文库的复杂度降低。作者 (Liu et al., 2019) 探索了一种新型的检测5mC和5hmC方法—TET辅助吡啶硼烷测序 (TAPS)。

生物材料：mESC细胞

实验目的

使用KAPA HyperPrep kit构建用于亚硫酸氢盐测序 (WGBS) 以及TET辅助吡啶硼烷测序 (TAPS) 的文库，并比较两种建库方式在不同起始量及不同样本条件下的建库结果，以证明TAPS的优势。

关键词：TAPS （TET辅助吡啶硼烷测序），二代测序，5hmC，5mC

创新应用

将该试剂盒应用到了甲基化建库，并评测了不同起始量的文库构建。

实验步骤