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骨骼肌肌肉干细胞流式分选

Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells by FACS

韩 韩莉莉
胡 胡苹

发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010352 浏览次数: 10134

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流式细胞术实验手册
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摘要：为了提高分离效率，采用两步法进行肌肉干细胞的分离和分选。首先分离小鼠骨骼肌，并将肌肉组织消化为单细胞悬液。然后利用流式分选的方法，使用杂细胞标签CD45、CD31和Sca I进行负筛后，再使用VCAM1进行阳性筛选，从而获得高纯度肌肉干细胞。采用此方法获得的肌肉干细胞可直接用于各种测序或进行细胞培养。

Keywords: 骨骼肌 search 肌肉干细胞 search VCAM1 search

材料与试剂

  1. 10 cm dish
  2. 培养皿
  3. 离心管
  4. 封口膜
  5. 移液管
  6. 10 ml注射器
  7. 20 G针头
  8. 40 μm滤膜
  9. FACS管
  10. 小鼠
  11. 马血清 (Hyclone, catalog number: SH30074.03) 
  12. Collagenase II (Worthington, catalog number: LS004177)
  13. Dispase (Life Technologies, catalog number: 17105-041)
  14. CD31-APC (Clone MEC13.3, BioLegend, catalog number: 102510, 4 °C)
  15. CD45-APC (Clone 30-F11, BioLegend, catalog number: 103112, 4 °C)
  16. Pacific Blue anti-mouse Ly-6A/E (Anti-Sca1，clone D7, BioLegend, catalog number: 108120, 4 °C) 
  17. Biotin anti-mouse CD106 (Anti-vascular cell adhesion molecule 1 (anti-VCAM 1)，clone 429, BioLegend, catalog number: 105704, 4°C) 
  18. F-10 (Gibco, catalog number: 11550-043)
  19. Penicillin-streptomycin mixture (Hyclone, catalog number: SV10030)
  20. PE/Cy7 streptavidin (BioLegend, catalog number: 405206, 4 °C)
  21. 乙醇
  22. PI
  23. Wash medium (WM) (见溶液配方)
  24. Muscle dissociation buffer (MDB) (见溶液配方)
  25. Stock collagenase II solution (见溶液配方)
  26. Stock  dispase solution (见溶液配方)

仪器设备

  1. 移液枪
  2. 眼科剪
  3. 尖头镊子
  4. 手术刀
  5. ZWY恒温水浴培养振荡器 (上海智城分析仪器制造有限公司，model: ZWF-110X30)
  6. 水平离心机 (Thermo Scientific，model: labofuge 400 R)
  7. 高速流式细胞分选仪-Aria Sorp (BD，FACS Aria SORP)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：韩莉莉, 胡苹. (2019). 骨骼肌肌肉干细胞流式分选. Bio-101: e1010352. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010352.
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How to cite: Han, L. L. and Hu, P. (2019). Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells by FACS. Bio-101: e1010352. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010352.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

干细胞 > 成体干细胞 > 肌肉干细胞

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